ERK抑制剂FR180204对多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞表达VEGF的影响

发布时间：2020-11-07 07:14

　　 目的利用细胞外信号调节激酶(Extracellular signal regulates kinase,ERK)抑制剂FR180204抑制卵巢颗粒细胞胰岛素信号通路丝裂原活化蛋白激酶(Mitosis actived protein kinase,MAPK)/ERK通路,研究多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome,PCOS)患者血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)过度表达与胰岛素通路MAPK/ERK通路异常激活的关系,从分子水平探讨PCOS的发生机制。方法收集2017年4月-7月期间于青岛大学附属医院生殖中心行人工助孕的PCOS患者和正常对照组患者各20例取卵日卵泡黄素化颗粒细胞,并进行提纯培养,其中PCOS患者颗粒细胞均分2份,分种于2瓶(A、B),所有A瓶中均加入指定的ERK信号转导通路抑制剂FR180204 5μL处理作为PCOS+IN组,B瓶加入5μLDMSO(配制FR180204溶剂)为PCOS组,对照组加入5μLDMSO为N-PCOS组。采用Western blot方法测定各组颗粒细胞ERK磷酸化和VEGF的表达程度。结果(1)对PCOS组与对照组患者的年龄、不孕年限、体重指数(BMI)、基础雌二醇(bE_2)、卵泡刺激素(bFSH)、泌乳素(bPRL)、促性腺激素药物(gonadotropin,Gn)启动量、Gn总用量方面指标进行统计比较,差异均无统计学意义(P0.05)。(2)与正常对照组相比,PCOS组的基础促黄体生成激素(bLH)、睾酮(bT)、获卵数明显更高,差异具有统计学意义(P0.05)。(3)比较PCOS组、N-PCOS组及PCOS+IN组ERK磷酸化程度及VEGF的表达量。PCOS组患者的ERK丝氨酸磷酸化程度及VEGF表达情况均较N-PCOS组高,差异具有统计学意义(P0.05);FR180204处理后PCOS+IN组ERK丝氨酸磷酸化程度及VEGF表达情况均较PCOS组降低,差异也具有统计学意义(P0.05),但仍高于N-PCOS组。结论PCOS患者卵巢颗粒细胞应用MAPK/ERK通道特异性阻滞剂FR180204后,ERK丝氨酸磷酸化下降,VEGF表达水平下降,提示阻滞MAPK/ERK通路后,VEGF过度表达情况得到改善。推测PCOS患者卵巢局部过度表达VEGF与MAPK/ERK通路异常激活相关。意义PCOS患者卵巢颗粒细胞过度表达VEGF,可能与胰岛素通路MAPK/ERK异常激活有关。增多的VEGF可能参与并推动了PCOS的一系列病理变化。目前,多数学者认为胰岛素通路磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K/AKT)通路障碍及MAPK/ERK通路异常激活导致了卵巢局部胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)的发生。由此推测PCOS患者卵巢局部过度表达VEGF与IR相关,提示我们可以通过改善PCOS患者IR从而抑制MAPK/ERK通路的异常激活,进而减少VEGF的分泌,以改善双侧卵巢多囊样改变、排卵障碍、血流信号异常等临床症状及降低卵巢过度刺激征(Ovarian hyperstimulation syndrome,OHSS)发生率。
【学位单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R711.75
【文章目录】：
摘要
abstract
引言
第一章 材料与方法
    1.1 实验材料
        1.1.1 仪器
        1.1.2 主要试剂及耗材
        1.1.3 研究对象
    1.2 实验方法
        1.2.1 主要溶液配制及实验室预处理
        1.2.2 卵巢黄素化颗粒细胞的收集培养及观察
        1.2.3 细胞蛋白的提取
        1.2.4 Westernblot检测ERK丝氨酸磷酸化程度、VEGF蛋白表达
    1.3 统计分析
第二章 结果
    2.1 一般资料
    2.2 颗粒细胞的培养情况
    2.3 Westernblot蛋白印迹法检测各组ERK丝氨酸磷酸化程度变化、VEGF表达情况
第三章 讨论
    3.1 PCOS与卵巢颗粒细胞
    3.2 PCOS与卵巢VEGF
    3.3 VEGF与bLH、BT
    3.4 MAPK/ERK信号通路与PCOS-IR
    3.5 MAPK/ERK途径与PCOS卵巢VEGF
    3.6 问题与展望
结论
参考文献
综述
    参考文献
附录
攻读学位期间研究成果
致谢

【参考文献】

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1 陈东思;刘建新;祁秀娟;丁钰;马文聪;;IRS-1、ERK2蛋白表达及其丝氨酸磷酸化程度与PCOS患者胰岛素抵抗的关系[J];中华妇产科杂志;2016年04期

2 陈东思;刘建新;;多囊卵巢综合征发病机制研究进展[J];青岛大学医学院学报;2015年06期

3 马文聪;刘建新;陈东思;;PCOS病人胰岛素抵抗两条主要信号通路机制的研究进展[J];青岛大学医学院学报;2015年06期

4 史晓明;祁秀娟;吕映频;刘海宁;王琳;孙娜;;多囊卵巢综合征患者血清VEGF及PEDF与卵巢过度刺激综合征的关系[J];现代妇产科进展;2015年05期

5 王滟;梁占光;杨业洲;;多囊卵巢综合症患者血浆及卵泡液血管内皮生长因子的测定及其与血清胰岛素水平的相关性研究[J];华西医学;2007年04期

6 闻姬,孙伟,宁玻,甄秀梅,王力,陈军;不育妇女卵泡液血管内皮生长因子水平与妊娠结局相关性[J];生殖医学杂志;2003年06期

7 陈静,汪鸿志;血管内皮生长因子的研究进展[J];中华内科杂志;1998年01期

本文编号：2873616