SIRT1在宫颈癌发生发展及化疗耐药中作用的初步研究

发布时间：2020-11-12 10:09

　　 目的:沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)为第III类组蛋白去乙酰化酶家族的一员,研究表明SIRT1在多种肿瘤中呈异常表达并与肿瘤的耐药密切相关。本研究通过细胞水平研究靶向SIRT1的小干扰RNA对宫颈癌Hela细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,探讨其在宫颈癌发生发展中的作用。在此基础上将siRNA-SIRT1与顺铂联合作用Hela细胞,检测SIRT1对相关耐药基因的影响。方法:化学合成靶向SIRT1的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)及其阴性对照序列,应用Lipofectamine RNAi MAX脂质体转染宫颈癌Hela细胞。实验分为三组:空白细胞对照组、阴性对照siRNA转染组和siRNA-SIRT1转染组。转染72h后,分别提取各组细胞总RNA和总蛋白。RT-PCR检测细胞中SIRT1 mRNA的表达;免疫印迹检测细胞SIRT1蛋白的表达。采用siRNA转染和顺铂药物联合作用Hela细胞,CCK-8法测定Hela细胞的增殖及顺铂对Hela的IC_(50)值;RT-PCR和qRT-PCR检测Hela细胞ABCC1和ABCG2 mRNA的表达;免疫印迹法检测Hela细胞ABCC1蛋白的表达水平;Transwell小室分别检测细胞的迁移和侵袭能力;流式细胞术检测Hela细胞凋亡。结果:RT-PCR结果显示:与阴性对照siRNA组和空白细胞对照组相比,siRNA-SIRT1组SIRT1 mRNA表达均明显下调(P0.05)。免疫印迹结果显示:与阴性对照siRNA组和空白对照组相比,siRNA-SIRT1组SIRT1蛋白的表达明显下调(P0.05)。CCK-8结果显示:顺铂对Hela细胞的IC_(50)值分别为5.34μM(24h)和3.70μM(48h)。siRNA-SIRT1与顺铂联合作用组中顺铂对Hela细胞的IC_(50)为1.58μM(24h),明显低于单独顺铂作用组。siRNA-SIRT1组细胞增殖抑制率为28.6%,而阴性对照si RNA组细胞增殖抑制率为6.3%,空白细胞对照组细胞增殖抑制率为4.7%。si RNA-SIRT1转染组的细胞增殖抑制率明显高于其他对照组(P0.05)。RT-PCR和qRT-PCR结果均显示:与阴性对照siRNA组和空白对照组相比,siRNA-SIRT1组ABCC1mRNA的表达明显下调(P0.05),而ABCG2表达无显著性差异。免疫印迹结果显示:与阴性对照siRNA组和空白对照组相比,siRNA-SIRT1组ABCC1蛋白的表达明显下调(P0.05)。与阴性对照siRNA和顺铂联合作用组及空白对照和顺铂联合作用组相比,siRNA-SIRT1转染和顺铂联合作用组的ABCC1蛋白的表达明显下调(P0.05)。细胞迁移和侵袭实验结果显示:siRNA-SIRT1转染组的细胞迁移和细胞侵袭能力均明显高于其他对照组(P0.05)。流式检测结果表明:空白细胞对照组细胞的早期凋亡率为2.9%,阴性siRNA对照组细胞的早期凋亡率为3.7%,siRNA-SIRT1组的细胞早期凋亡率为11.7%。与阴性对照si RNA组和空白细胞对照组相比,siRNA-SIRT1组细胞的早期凋亡率明显提高(P0.05)。结论:siRNA-SIRT1不仅能抑制宫颈癌发生细胞的增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡,而且可以下调耐药基因ABCC1的表达,其与顺铂的联合作用可以通过降低耐药基因ABCC1表达进而提高Hela细胞对顺铂的敏感性。SIRT1有望通过影响ABCC1的表达进一步逆转宫颈癌的化疗耐药。
【学位单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R737.33
【部分图文】：

结果结 果 Hela 细胞 SIRT1 表达的影响ela 细胞 SIRT1 mRNA 水平实验，选择最佳转染浓度为 30nM 的小干阴性对照 siRNA 组和空白细胞对照组均显对照组及空白细胞对照组相比，siRNA-SIRT降（P<0.05），差异有统计学意义，见图 1。

12图 2. siRNA-SIRT1 对 SIRT1 蛋白的表达的影响. Effects of siRNA-SIRT1 on the expressions of SIRT1 proestern blot 结果； B：Western blot 检测 SIRT1 灰度值对照 siRNA 转染组、空白对照组相比，***P<0.0001

结果-SIRT1 对 Hela 细胞增殖及顺铂 IC50的影响-8 结果显示：siRNA-SIRT1 转染组细胞增殖抑制率为 28.6%，细胞的增殖抑制率为 6.3%，空白细胞对照组细胞增殖抑制率为 siRNA 组和空白对照组相比，siRNA-SIRT1 组细胞的增殖抑制率计学意义（P<0.05）。测得顺铂对 Hela 细胞 24h 的 IC50为 5.34μMM。siRNA-SIRT1 与顺铂联合作用，测得顺铂对 Hela 细胞 24h 与单独顺铂作用相比，siRNA-SIRT1 与顺铂联合作用组细胞的 I 3。
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本文编号：2880617