EpCAM-ING1-CART在三阴性乳腺癌及卵巢癌中的治疗作用研究
发布时间：2020-11-18 14:37
目的:研究EpCAM-ING1-CART在三阴性乳腺癌及卵巢癌中的治疗作用。方法:免疫组化检测三阴性乳腺癌组织中EpCAM及EGFR抗原的表达差异,以及EpCAM在癌旁组织中的表达水平。流式细胞术检测不同人乳腺癌细胞系之间EpCAM的表达差异以及卵巢癌细胞系SKOV3的EpCAM表达情况。针对EpCAM抗原的Exon2序列设计CAR,称为EpCAM-ING1-CAR。慢病毒系统构建EpCAM-ING1-CAR阳性表达的T细胞,流式细胞术检测EpCAM-ING1-CAR的表达情况。流式细胞术分析杀伤效应,ELISA实验检测IFN-γ的释放量。细胞免疫荧光检测恶性浆膜腔诱导后的SKOV3是否发生EMT变化。结果:免疫组化结果显示EpCAM和EGFR在三阴性乳腺癌组织中均高表达,而Ep CAM表达尤为显著。Western Blot和流式细胞术提示EpCAM在MDA-MB-468细胞及SKOV3细胞中表达水平较高。MDA-MB-231细胞部分表达EpCAM抗原。ELISA实验证实EpCAM-ING-1-CART与MDA-MB-468及SKOV3共培养时,其IFN-γ的释放量高于Control-T。在三阴性乳腺癌细胞治疗中,流式细胞术显示EpCAM-ING-1-CART可有效杀伤高表达EpCAM抗原的MDA-MB-468细胞,而对低表达EpCAM的MDA-MB-231细胞也具有杀伤作用。细胞免疫荧光证实恶性浆膜腔积液诱导后,SKOV3会发生EMT变化。流式细胞术分析显示,EpCAM-ING1-CART既可杀伤SKOV3细胞,也可杀伤发生EMT变化后的SKOV3细胞。结论:EpCAM-ING1-CART对三阴性乳腺癌及卵巢癌均有治疗作用。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R737.9;R737.31
【部分图文】：
MDA-MB-468 MDA-MB-231 SKOV3图 2 EpCAM 在乳腺癌细胞株及卵巢癌细胞株中的表达量Figure 2 The expression of EpCAM in breast cancer cell lines and ovarian cancer cell lines2.3 EpCAM-ING1-CAR 的表达及 IFN-γ释放检测病毒感染后 48h 检测 CAR 的表达情况。以未感染 T 细胞为对照（Control-T），则 EpCAM-ING1-CAR 的表达量为 57.74%（见图 3A.）。将 Control-T 细胞、EpCAM-ING1-CART 细胞分别与阳性靶细胞 MDA-MB-468 及 SKOV3 按效靶比为8:1，4:1，2:1，1:1 的比例混合培养后，检测 IFN-γ的释放量。其检测结果如下：以 MDA-MB-468 为靶细胞，CAR-T 组的 IFN-γ浓度分别为 3083.56±38.14pg/ml、3507.53±72.51pg/ml、3337.68±67.60pg/ml、2421.45±79.55pg/ml，而 Control-T 组 IFN-γ 浓 度 分 别 为 -28.34±6.40pg/ml 、 -45.20±2.70pg/ml 、 -42.97±4.23pg/ml 、
19A：流式细胞术检测 EpCAM-ING1-CART 在效靶比为 1:1,2:1 及 4:1 条件下，阴阳靶细胞的存活比例；B：流式细胞术检测 Control-T 在效靶比为 1:1,2:1 及 4:1 条件下，阴阳靶细胞的存活比例；C：无 T 细胞时的阴阳靶细胞比例；D：EpCAM-ING1-CAR-T 与 Control-T杀肿瘤效应计算。图 4 EpCAM-ING-1-CART 可有效杀伤 MDA-MB-468 细胞Figure 4 The EpCAM-ING1-CART works in the killing of MDA-MB-468 cells2.5 流式细胞术检测 EpCAM-ING-1-CART 对 MDA-MB-231 的杀伤效应以 MDA-MB-231 为阳性靶细胞，MCF7 为阴性靶细胞，流式分别检测每种效
重庆医科大学硕士研究生学位论文靶比下，CAR-T 及 Control-T 的杀伤效应。在效靶比为 2:1，4:1，8:1 时，CAR-T组的阳性靶细胞比例分别为 29.1%，7.7%，0.975%,阴性靶细胞比例分别为 25.5%，14.8% ，3.83%(如图 5A.)；而 Control-T 组的阳性靶细胞比例分别为 67.6%，65.3%，65.6%，阴性靶细胞比例分别为 29.4%，26.9%，23.3%（如图 5B.）；无 T 细胞对照组阳性靶细胞比例为 66.5%，阴性靶细胞比例为 32.1%（见图 5C.）；CAR-T 组的杀伤活性分别为 45.0%，75.0%，88.0%，Control-T 组杀伤活性为-11%，-17%，-36%。CAR-T 组杀伤活性远高于 Control-T 组（P=0.0439）（见图 5D.）
【参考文献】
本文编号：2888830
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R737.9;R737.31
【部分图文】：
MDA-MB-468 MDA-MB-231 SKOV3图 2 EpCAM 在乳腺癌细胞株及卵巢癌细胞株中的表达量Figure 2 The expression of EpCAM in breast cancer cell lines and ovarian cancer cell lines2.3 EpCAM-ING1-CAR 的表达及 IFN-γ释放检测病毒感染后 48h 检测 CAR 的表达情况。以未感染 T 细胞为对照（Control-T），则 EpCAM-ING1-CAR 的表达量为 57.74%（见图 3A.）。将 Control-T 细胞、EpCAM-ING1-CART 细胞分别与阳性靶细胞 MDA-MB-468 及 SKOV3 按效靶比为8:1，4:1，2:1，1:1 的比例混合培养后，检测 IFN-γ的释放量。其检测结果如下：以 MDA-MB-468 为靶细胞，CAR-T 组的 IFN-γ浓度分别为 3083.56±38.14pg/ml、3507.53±72.51pg/ml、3337.68±67.60pg/ml、2421.45±79.55pg/ml，而 Control-T 组 IFN-γ 浓 度 分 别 为 -28.34±6.40pg/ml 、 -45.20±2.70pg/ml 、 -42.97±4.23pg/ml 、
19A：流式细胞术检测 EpCAM-ING1-CART 在效靶比为 1:1,2:1 及 4:1 条件下，阴阳靶细胞的存活比例；B：流式细胞术检测 Control-T 在效靶比为 1:1,2:1 及 4:1 条件下，阴阳靶细胞的存活比例；C：无 T 细胞时的阴阳靶细胞比例；D：EpCAM-ING1-CAR-T 与 Control-T杀肿瘤效应计算。图 4 EpCAM-ING-1-CART 可有效杀伤 MDA-MB-468 细胞Figure 4 The EpCAM-ING1-CART works in the killing of MDA-MB-468 cells2.5 流式细胞术检测 EpCAM-ING-1-CART 对 MDA-MB-231 的杀伤效应以 MDA-MB-231 为阳性靶细胞，MCF7 为阴性靶细胞，流式分别检测每种效
重庆医科大学硕士研究生学位论文靶比下，CAR-T 及 Control-T 的杀伤效应。在效靶比为 2:1，4:1，8:1 时，CAR-T组的阳性靶细胞比例分别为 29.1%，7.7%，0.975%,阴性靶细胞比例分别为 25.5%，14.8% ，3.83%(如图 5A.)；而 Control-T 组的阳性靶细胞比例分别为 67.6%，65.3%，65.6%，阴性靶细胞比例分别为 29.4%，26.9%，23.3%（如图 5B.）；无 T 细胞对照组阳性靶细胞比例为 66.5%，阴性靶细胞比例为 32.1%（见图 5C.）；CAR-T 组的杀伤活性分别为 45.0%，75.0%，88.0%，Control-T 组杀伤活性为-11%，-17%，-36%。CAR-T 组杀伤活性远高于 Control-T 组（P=0.0439）（见图 5D.）
【参考文献】
相关期刊论文 前1条
1 ;Breast Cancer Immunotherapy[J];Cellular & Molecular Immunology;2004年04期
本文编号：2888830
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/fuchankeerkelunwen/2888830.html
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