辐射介导下HeLa细胞内IER5与Cdc25B表达关系研究

发布时间：2021-01-01 05:40

　　目的:探索辐射介导下HeLa细胞内IER5的生物学功能及IER5与Cdc25B表达的关系。方法:采用4 Gy γ射线分别照射HeLa细胞和siIER5-HeLa细胞,收集照射后0、0.5、2、4、8、12、16、24、36、48h的细胞样本,并设未照射细胞为对照组。采用Western blot检测细胞内IER5和Cdc25B蛋白的表达;流式细胞术检测照射后G2期周期阻滞情况。另外对HeLa细胞分别转染siNC和siIER5,对siIER5-HeLa细胞分别转染IER5过表达质粒与空载体质粒,然后采用2Gy和4Gy γ射线照射各组细胞,收集照射后0.5、2、4、8、12、24h和对照组细胞样,通过流式细胞术,qPCR和Western blot检测细胞内G2/M期阻滞及IER5与Cdc25B mRNA和蛋白水平变化。通过生物信息学分析及查阅相关文献筛选出可能参与IER5调控Cdc25B基因转录的调控因子,通过干扰HeLa细胞内IER5的表达后,检测各转录调控蛋白水平变化,来初步探索在辐射介导下IER5影响Cdc25B转录可能的机制。结果:1.在4Gy剂量辐射介导下HeLa细胞组与siIER... 

【文章来源】：中国疾病预防控制中心北京市

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
中英文缩略词表
一、引言
二、材料与方法
    1. 材料
        1.1 细胞
        1.2 siRNA与质粒
        1.3 试剂
        1.4 抗体
        1.5 仪器
        1.6 溶液配制
    2. 方法
        2.1 细胞培养
            2.1.1 细胞复苏
            2.1.2 细胞传代
            2.1.3 细胞冻存
            2.1.4 细菌培养
            2.1.5 质粒提取
            2.1.6 菌种保种
60Coγ射线照射">            2.1.7 ⁶⁰Coγ射线照射
            2.1.8 细胞收集
        2.2 流式细胞术（Flow Cytometry,FCM）检测细胞周期
            2.2.1 固定细胞
            2.2.2 清洗细胞
            2.2.3 PI染色
        2.3 实时荧光定量PCR实验（realtime PCR）
            2.3.1 总RNA提取
            2.3.2 总RNA检测
            2.3.3 RNA变性
            2.3.4 RNA逆转录成cDNA
            2.3.5 qPCR反应
        2.4 蛋白免疫印迹（Western blot）检测
            2.4.1 总蛋白提取
            2.4.2 浓度测定与定量
            2.4.3 蛋白变性
            2.4.4 Western blot实验步骤
        2.5 数据分析
            2.5.1 流式周期检测结果数据处理
            2.5.2 qPCR数据处理
            2.5.3 Western blot数据处理
三、结果
    1. 辐射介导下HeLa内G2/M期阻滞及IER5与Cdc25B表达情况研究
    2. 辐射介导下HeLa细胞转染siIER5后Cdc25B蛋白表达研究
    3. 辐射介导下siIER5-HeLa细胞转染IER5过表达质粒后Cdc25B蛋白表达研究
    4. 参与IER5调控Cdc25B转录相关的调控蛋白的初步筛选与验证
四、讨论
五、结论
致谢
参考文献
个人简介
附录1
附录2


【参考文献】：
期刊论文
[1]辐射介导下HeLa细胞中Cdc25B与IER5蛋白表达的关系[J]. 赵现哲,刘晓丹,周平坤,姜晓燕,丁库克.  癌变·畸变·突变. 2017(06)
[2]细胞分裂周期蛋白CDC25B抑制剂研究进展[J]. 沈佳汇,陈立,杨天训,苗冉冉,李亚楠.  中国新药杂志. 2014(24)
[3]细胞分裂周期蛋白2启动子报告基因载体的构建与鉴定[J]. 周辉,吴炜,赵明.  天津医药. 2014(02)
[4]利用RNA干扰技术构建IER5-SiRNA-Hela细胞系[J]. 李莉,赵焕英,杨川杰,鲁苇媛,郝淳,乔茶,周平坤,徐勤芝,丁库克.  中国实验诊断学. 2011(01)
[5]IER5基因对HeLa细胞辐射敏感性的影响[J]. 李秀楠,李莉,杨川杰,郝淳,乔茶,杨芬,周平坤,王佩,袁增强,李延玲,鲁玮媛,张为远,丁库克.  生物化学与生物物理进展. 2009(07)
[6]γ射线照射对IER5基因mRNA表达的影响[J]. 丁库克,沈晶晶,许莉莉,李延玲,周萍,马斌荣,赵增强,隋建丽,周平坤.  中华放射医学与防护杂志. 2008 (01)

硕士论文
[1]辐射后HepG2细胞IER5与Cdc25B启动子的相互作用[D]. 杨明月.河北医科大学 2014



本文编号：2951022