基于实时荧光环介导等温扩增的HPV16及HPV18检测体系的建立

发布时间：2021-01-17 13:13

　　目的建立用于人乳头瘤病毒HPV16及HPV18快速检测的实时荧光环介导等温扩增技术。方法运用在线LAMP引物设计软件Primer Explorer V5,针对HPV16、18基因保守序列设计扩增引物,在反应前加入核酸染料SYBR GreenⅠ并对LAMP反应体系中内引物、Mg²⁺、dNTPs进行优化,优化结果通过实时荧光扩增曲线确定;然后对优化的HPV16、18 LAMP反应体系进行特异性、灵敏度检测及临床标本检测。结果建立的实时荧光环介导等温扩增体系检测HPV16及HPV18的特异性为100%,与qPCR方法的符合率为100%。该体系检测HPV16及HPV18质粒的灵敏度为10拷贝/μl。结论建立的实时荧光环介导等温扩增体系检测HPV16、18简便、快速,灵敏度高,可用于HPV感染的早期筛查。 

【文章来源】：中国病原生物学杂志. 2020,15(01)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

Mg2+浓度的优化结果

LAMP反应体系包括3种引物:内引物(FIP,BIP)、外引物(F3,B3)、环引物(LF,LB)。在Bst DNA聚合酶的作用下,内引物的延伸产物被置换,形成"哑铃"状结构,在环引物的引导下,扩增反应得以加速;在LAMP反应中,内引物要自身弯折互补形成茎环,所以需要较长的碱基序列。当内引物浓度过时,反而会造成引物间二级结构的产生。本试验分别选取0.8、1.2、1.6、2 μmol/L的内引物浓度进行试验,结果见图3。当浓度比从0.8 μmol/L～1.2 μmol/L变化时,荧光曲线逐渐出现扩增表现,并且随着浓度比例的增加起峰时间(Ct)越来越早;当浓度比为2 μmol/L时,虽然峰值增加,但是起峰时间(Ct)较晚。因此确定内引物(FIP,BIP)的最佳浓度比为1.6 μmol/L。图3 内引物浓度比例优化

内引物浓度比例优化

【参考文献】：
期刊论文
[1]基于实时荧光环介导等温扩增快速检测鸡肉中的大肠杆菌O157:H[J]. 赵远洋,王瑾,林丽萍,郜彦彦,吴国平.  中国食品学报. 2019(03)
[2]高危HPV基因分型PCR检测在宫颈癌及癌前病变早期筛查中的诊断价值[J]. 黄艳,王欢欢,程龙海.  中国妇幼保健. 2019(04)
[3]宫颈癌患者人乳头瘤病毒多重感染病原学特征分析[J]. 高爱华,朱维培.  中国病原生物学杂志. 2018(08)
[4]全球新发传染病的挑战与防控[J]. 陈永平.  中华传染病杂志. 2018 (07)
[5]环介导等温扩增快速检测HIV-1 DNA病毒[J]. 张永乐,厉小玉,潘克女,蔡兆斌,章松平,朱明利,周俊,刘寿荣.  中华全科医学. 2014(04)



本文编号：2982952