转染人附睾蛋白4基因对人卵巢癌细胞基因表达的影响

发布时间：2021-01-27 07:04

　　目的探讨转染人附睾蛋白4 （HE4）基因对卵巢癌细胞ES-2基因表达的影响。方法构建HE4高表达及空质粒对照组细胞系,通过基因芯片探寻存在差异表达的基因,并对其进行基因本体（GO）注释和富集分析、京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路分析,并对芯片结果进行验证。结果有639个基因发生了差异表达,其中上调基因283个,下调基因356,实时PCR及免疫组化方法对差异表达基因FOXA2和SERPIND1进行了RNA和蛋白水平的验证,结果与芯片结果相一致。GO富集分析发现差异基因在生物过程中,参与了生物高聚物代谢、程序性细胞死亡及凋亡等,KEGG通路分析发现这些基因与MAPK、性激素生物合成、癌症、细胞周期和p53信号等有关。结论与HE4相关的基因表达谱序列的变化可以为HE4在卵巢癌中功能及作用通路等分子机制的研究提供理论基础。 

【文章来源】：中国医科大学学报. 2020,49(05)北大核心

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

转染细胞的总RNA凝胶电泳

对差异表达基因进行KEGG通路分析，发现MAPK、性激素生物合成、癌症、细胞周期、p53信号等通路显著富集，见表5。2.5 实时PCR及免疫组织化学方法验证芯片结果

在差异表达基因中挑选2个表达上调的基因（FOXA2、SERPIND1）进行了实时PCR实验以验证芯片结果的可靠性，结果显示，基因FOXA2的mRNA相对表达在HE4转染组细胞中为4.712±1.504，明显高于空质粒转染组（1.177±0.264,P=0.002）及原始未处理组（1.238±0.394,P=0.002）的表达量，而后两组的表达量差异无统计学意义（P=0.757）；基因SERPIND1的mRNA相对表达在HE4转染组细胞中为1.703±0.487，明显高于空质粒转染组（0.956±0.246,P=0.006）及原始未处理组（0.959±0.080,P=0.006）的表达量，而后两组的表达量差异无统计学意义（P=0.977）。实时PCR的结果与基因芯片显示的结果相一致。将经过实时PCR验证的SERPIND1通过免疫组化方法进行蛋白水平的验证。结果显示，类似于HE4,SERPIND1在细胞中的表达以胞质及胞膜中为主（图3),HE4及SERPIND1在卵巢癌组织中的阳性表达率分别为78%及88%，高表达率分别为66%及62%。进一步分析发现，在50例标本中，HE4及SERPIND1同时阴性的有4例，同时阳性的有37例，Spearman相关性分析提示两者表达呈正相关（r=0.402,P=0.003）。以上通过基因及蛋白水平，验证了基因芯片结果的可靠性。见表6。3 讨论

【参考文献】：
期刊论文
[1]卵巢癌化疗耐药标志物的研究进展[J]. 林贵玲,康玉,徐丛剑.  实用妇产科杂志. 2018(12)
[2]HE4与妇科肿瘤相关性的研究进展[J]. 李芳,吴素慧.  国际妇产科学杂志. 2017(04)



本文编号：3002656