ERα/β过表达对SKOV-3细胞中Plexin-B1的影响

发布时间：2021-03-11 03:19

　　[目的]探讨通在卵巢浆液性癌SKOV-3细胞株中过表达雌激素受体ERα/β,检测雌激素结合不同受体对Plexin-B1的影响。[方法]1、通过慢病毒转染的方法,把过表达ER α及ER β的载体转染到SKO V-3细胞株中,构建高表达ER α/β的SKOV-3细胞株。将培养好的细胞分为对照组（空白组）、过表达ER a组（ER α）、过表达ERβ组（ER β）。2、慢病毒感染SKOV-3细胞24小时,RT-PCR及Western Blotting检测过表达ER a组（ER α）、过表达ER β组（ER β）两组细胞感染前后SKOV-3细胞中ERα、ERβ表达情况。3、利用MTT实验检测将17β-雌二醇（10-6mol/L）及雌激素受体拮抗剂ICI180,782 （100 nM）单独及共同处理SKOV-3细胞24h后,检测对照组、过表达ER α组、过表达ER β组三组SKOV-3各组细胞活性的影响。4、慢病毒感染细胞24h后,利用Western Blotting及RT-PCR分别检测对照组、ER α组、ER β组中Plexin-B1总蛋白、RNA表达情况。5、用17 β-雌二醇（10-6mo... 

【文章来源】：昆明医科大学云南省

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１实验思路图??

????结果??１、构建过表达ＥＲａ及ＥＲ目的卵巢癌化ＯＶ－３细胞株??１．１?ＥＲ?ａ及ＥＲ目过表达载体慢病毒转染ＳＫＯＶ－３细胞，构建过表达ＥＲ?ａ及ＥＲ??ｅ的卵巢浆液癌细胞??ＥＲａ及ＥＲ目高表达载体委托广州复能公司构建质粒（ＧＦＰ标签），培养??ＳＫＯＶ－３细胞株。将细月包分为Ｃｏｎ化〇１组、Ｅ民ａ组、ＥＲ目组，慢病毒转染２４小??时后巧光显微镜下观察感染效率，若绿色巧光占视野７０％＾上证明感染成功、细??胞存活率大于９５％。通过图１显示：利用慢病毒转染后的过表达Ｅ民。组、过表??达ＥＲ日组绿色巧光均大于７０％。研究印明：感染成功，并可利用ＥＲａ及ＥＲ??目过表达载体慢病毒转染ＳＫＯＶ－３如胞构建过表达Ｅ民ａ及ＥＲＰ的人卵巢浆??液癌细胞模型。??

为了进一步证明ＥＲａ及Ｅ民Ｐ在转染后的ＳＫ０Ｖ－３细胞中稳定过表达，??分别采用转染后的化０Ｖ－３细胞传代，培养２４小时后进行Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔｔｉｎｇ和Ｒ??Ｔ－ＰＣＲ进行检测（图３、图４）。结果表明：ＥＲａ及ＥＲＰ在转染后的ＳＫ０Ｖ－３??细胞稳定高表达（Ｐ＜〇．〇５），可Ｗ进行后续实验。??Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＥＲｔｔ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＥＲ?ｐ??ＥＲａ?ＥＲ?ｐ??Ｉ?Ｐ－ａｃｔ善?Ｉ?？?１??８０?ｆ?＃?１８０?冉??Ｌａ?１加■??？ｔ?１?？２０?■?圓??—ｉＬｉｌＬ??图３；利用Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测Ｅ民ａ、Ｅ民６蛋白在转染后的ＳＫＯＶ－３细胞中稳定??高表达??Ｆｉｇ．３：?Ｔｈｅ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｅｘｐｉ＊ｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?Ｅ民ａａｎｄ?Ｅ民｜３ｗａｓ?ｄｅｔｅｃ化ｄ?ｉｎ?ｔｒａ


本文编号：3075769