血清刺激PI3K/AKT通路调控核仁转录及UBF1磷酸化

发布时间：2021-04-20 23:50

　　目的：初步探讨PI3K/AKT通路在血清刺激宫颈癌HeLa细胞UBF1磷酸化及核仁转录中的调控作用。方法：通过Realtime PCR技术和Western Blot技术分别检测血清刺激和血清饥饿对细胞的核仁转录状态及UBF S388磷酸化、PI3K/AKT通路活化的影响；再分别用P13K抑制剂及AKT抑制剂处理血清刺激的细胞以阻断相应通路,借助Realtime PCR技术、Western Blot技术和Lucif erase Assay技术观察PI3K/AKT通路对血清刺激后的核仁转录、UBF S388磷酸化、核糖体基因（rDNA）启动子活性的影响；随后通过Western Blot实验和Luciferase Assay实验来比较PI3K α抑制剂、PI3K β抑制剂及LY294002对HeLa细胞内PI3K/AKT通路的阻断作用、UBF S388磷酸化状态及rDNA启动子活性的影响。最后通过Western Blot技术和PI染色流式细胞术检测P13K通路和Akt通路各自对下游mTORCl通路活化、周期蛋白cyclinE和cyclinA的蛋白水平及细胞周期的影响是否存在差异。结果：血清饥... 

【文章来源】：广州中医药大学广东省

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
第一部分 血清刺激影响核仁转录及UBF活化
    1.1 材料
        1.1.1 试剂及耗材
        1.1.2 仪器
        1.1.3 实验所用细胞系
        1.1.4 主要试剂和溶液的配制
    1.2 实验方法
        1.2.1 HeLa细胞株的培养
        1.2.2 血清饥饿处理
        1.2.3 血清刺激处理
        1.2.4 Reverse Transcription PCR
        1.2.5 Real-time PCR
        1.2.6 Western blot实验
    1.3 结果
        1.3.1 血清饥饿对核仁转录及UBF活化影响
        1.3.2 血清刺激对核仁转录及UBF活化影响
    1.4 讨论
第二部分 PI3K/AKT通路参与血清刺激调控核仁转录
    2.1 材料
        2.1.1 主要试剂和耗材
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 主要溶液配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 RT-PCR
        2.2.2 Western blot实验
        2.2.3 荧光素酶检测实验（Luciferase Assay）
    2.3 结果
        2.3.1 PI3K/AKT通路参与血清刺激调控核仁转录
        2.3.2 PI3K/AKT通路参与调控血清刺激UBF磷酸化
        2.3.3 I A型PI3K参与核仁转录调控
        2.3.4 PI3K/AKT通路调控rDNA启动子活性
    2.4 讨论
第三部分 PI3K、AKT对核仁转录的调控有区别
    3.1 材料
        3.1.1 主要试剂和耗材
        3.1.2 主要仪器
        3.1.3 主要溶液配制
    3.2 主要实验方法
        3.2.1 Western Blot实验
        3.2.2 流式细胞术检测细胞周期
    3.3 结果
        3.3.1 PI3K和AKT对下游mTOR调控不同
        3.3.2 PI3K和AKT对下游cyclinE和cyclinA的调控不同
        3.3.3 PI3K和AKT对细胞周期的调控不同
    3.4 讨论
结语
参考文献
附录
    附录1：英文缩写注解（Alphabatic）
    附录2：综述
        参考文献
在校期间发表论文情况
致谢
统计学审核证明



本文编号：3150633