转录因子NF-κB1调控SERPIND1对卵巢癌细胞恶性生物学行为的影响和机制研究

发布时间：2021-05-12 07:16

　　目的:本实验检测SERPIND1在卵巢上皮性肿瘤组织和正常卵巢组织中的表达,并分析SERPIND1与病理参数之间的关系;还检测分析了SERPIND1的相互作用蛋白种类;构建差异表达SERPIND1的上皮性卵巢癌细胞系,探究差异表达SERPIND1对卵巢癌细胞恶性生物学行为的影响及相关调控机制;还对SERPIND1基因启动因子区进行了初步探索,其结果对于卵巢上皮性肿瘤标志物的检测、术后随访及后续治疗等都具有广阔的临床应用前景。研究方法:分别使用免疫组织化学、蛋白印迹等方法检测:SERPIND1在卵巢上皮性肿瘤组织、正常卵巢组织（来源于因宫颈癌手术术中切除的正常卵巢标本）、卵巢癌细胞系中的表达情况,并分析患者临床病理参数与SERPIND1表达间的相关性。通过对113例原发性卵巢上皮性恶性肿瘤患者进行术后随访调查,分析SERPIND1的表达对患者总生存时间、疾病无进展生存时间之间的关系。同时提取卵巢上皮性肿瘤组织和正常卵巢组织中的蛋白质,通过蛋白印迹法方法检测SERPIND1的表达情况。进一步分析卵巢上皮性肿瘤组织和正常卵巢组织中SERPIND1在蛋白水平上的表达差异。并分别构建SERPIN... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：74 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :SERPIND1在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 材料
            2.1.1 标本来源
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器
            2.1.4 主要工作液的配制
        2.2 方法
            2.2.1 免疫组织化学
            2.2.2 蛋白印迹法
        2.3 统计学分析
    3 结果
        3.1 SERPIND1在各组卵巢组织中的表达情况
        3.2 SERPIND1的表达与卵巢癌临床病理参数的关系
        3.3 SERPIND1表达与卵巢癌患者预后的关系
        3.4 SERPIND1蛋白在各组卵巢组织中的表达情况
        3.5 SERPIND1蛋白在人卵巢癌细胞系中的表达
    4 讨论
    5 结论
第二部分 :SERPIND1对上皮性卵巢癌细胞生物学行为的影响
    6 前言
    7 材料和方法
        7.1 材料
            7.1.1 细胞系
            7.1.2 主要材料
            7.1.3 主要仪器
        7.2 方法
            7.2.1 细胞培养
            7.2.2 细胞转染及稳转细胞系的构建
            7.2.3 干扰SERPIND1细胞系建立
            7.2.4 real-time PCR检测目的基因的表达
            7.2.5 划痕试验检测细胞迁移能力
            7.2.6 细胞体外侵袭实验
            7.2.7 MTT检测细胞增殖能力
            7.2.8 流式细胞仪检测细胞周期
            7.2.9 流式细胞仪检测细胞凋亡
            7.2.10 裸鼠体内成瘤实验
            7.2.11 免疫共沉淀验证SERPIND1与Vimentin为相互作用蛋白
        7.3 统计学分析
    8 结果
        8.1 差异表达SERPIND1对卵巢细胞癌细胞迁移能力的影响
        8.2 差异表达SERPIND1对卵巢癌细胞侵袭能力的影响
        8.3 差异表达SERPIND1对卵巢癌细胞增殖能力的影响
        8.4 差异表达SERPIND1对卵巢癌细胞周期的影响
        8.5 差异表达SERPIND1对卵巢癌细胞凋亡能力的影响
        8.6 差异表达SERPIND1对卵巢癌细胞体内成瘤能力的影响
        8.7 利用免疫共沉淀进行验证SERPIND1与Vimentin为相互作用蛋白
    9 讨论
    10 结论
第三部分 :SERPIND1影响上皮性卵巢癌细胞生物学行为的机制研究
    11 前言
    12 材料和方法
        12.1 材料
            12.1.1 细胞系
            12.1.2 主要材料
            12.1.3 主要仪器
        12.2 方法
            12.2.1 细胞培养及处理
            12.2.2 蛋白印迹法检测SERPIND1基因转染前后PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、MMP2及MMP9等蛋白的表达
            12.2.3 细胞转染及稳转细胞系的构建
            12.2.4 划痕试验检测细胞迁移能力
            12.2.5 细胞体外侵袭实验
            12.2.6 MTT检测细胞增殖能力
            12.2.7 流式细胞仪检测细胞周期变化
            12.2.8 流式细胞仪检测细胞凋亡变化
            12.2.9 CHIP实验检测转录因子与SERPIND1启动子区结合的结合情况
        12.3 统计学分析
    13 结果
        13.1 差异表达SERPIND1基因前后PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、MMP2及MMP9等蛋白的变化
        13.2 过表达SERPIND1的卵巢癌细胞系中加入PI3K/AKT通路抑制剂LY294002后生物学行为的改变
        13.3 转录因子NF-κB1可以结合于SERPIND1的启动子区,并调控SERPIND1的表达
    14 讨论
    15 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3182990