环状RNA在BPA致精母细胞毒性中的保护性作用及机制研究

发布时间：2021-06-13 01:24

　　第一部分:非编码RNA在双酚A致小鼠精母细胞凋亡中的表达谱改变【目的】分析非编码RNA在双酚A致小鼠精母细胞凋亡中表达谱的改变,分析其参与的重要通路和相关分子,寻找进一步研究的靶标。【方法】采用不同浓度的BPA对小鼠精母细胞系GC-2细胞进行染毒,对照组为0.1%DMSO溶剂组处理的GC-2细胞,采用Cell Counting Kit-8（CCK-8）试剂盒检测细胞活性,探索BPA处理对GC-2细胞在半抑制浓度IC50。选择接近于IC50的120μM浓度对细胞进行染毒,检测细胞DNA复制能力和凋亡率。对BPA 120μM处理48 h后以及对照组的细胞进行收集,提取RNA。将样品分为三份,分别进行circular RNA（circ RNA）,micro RNA（mi RNA）和m RNA测序,测序深度为10G。circ RNA、mi RNA和m RNA测序深度分别为10G、10M和6G。差异表达的circ RNA母基因的和m RNA的GO和KEGG分析采用R语言的Bioconductor包进行分析,并用ggplot包进行图形可视化输出。差异mi RNA参与生物学功能和信号通路分析是基于其... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：221 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

CCK-8实验检测不同剂量BPA处理下细胞活性

图 2. Edu 掺入检测细胞 DNA 复制活性。a.0 μM 和 120 μM 的 BPA 处理 GC-2 细胞 48 h 后Edu 增殖实验；b.定量展示 a 图 Edu 掺入百分比。实验重复次数 3 次，数据以均值±标准误展示（***P < 0.0001）。3.1.3 流式细胞学检测 BPA 染毒后细胞凋亡情况。采用流式细胞学仪以Annexin V-APC/7-AAD试剂盒检测为暴露组和120 μM BPA暴露组细胞的凋亡率，处理组细胞凋亡率（早期凋亡率 LR% + 晚期凋亡率 UR%）约为 17%左右，较未处理组细胞凋亡率（7.5%左右）明显升高（图 3）（***P < 0.001）。

图 2. Edu 掺入检测细胞 DNA 复制活性。a.0 μM 和 120 μM 的 BPA 处理 GC-2 细胞 48 h 后Edu 增殖实验；b.定量展示 a 图 Edu 掺入百分比。实验重复次数 3 次，数据以均值±标准误展示（***P < 0.0001）。3.1.3 流式细胞学检测 BPA 染毒后细胞凋亡情况。采用流式细胞学仪以Annexin V-APC/7-AAD试剂盒检测为暴露组和120 μM BPA暴露组细胞的凋亡率，处理组细胞凋亡率（早期凋亡率 LR% + 晚期凋亡率 UR%）约为 17%左右，较未处理组细胞凋亡率（7.5%左右）明显升高（图 3）（***P < 0.001）。


本文编号：3226702