G蛋白偶联受体30对子宫内膜癌细胞增殖及凋亡的影响及其机制探讨

发布时间：2021-06-19 12:45

　　目的:研究G蛋白偶联受体30（G protein-coupled receptor 30,GPR30）对子宫内膜癌细胞增殖及凋亡能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:将靶向GPR30的shRNA（shRNA-GPR30）或携带有GPR30全基因的慢病毒（LV-GPR30）分别导入子宫内膜癌Ishikawa和KLE细胞中,构建沉默GPR30和过表达GPR30的细胞株,然后用蛋白质印迹法检测转染效率。采用CCK-8法检测沉默或过表达GPR30对子宫内膜癌细胞增殖能力的影响,采用FCM法检测沉默或过表达GPR30对子宫内膜癌细胞凋亡能力的影响。采用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测沉默或过表达GPR30对内质网应激标志蛋白葡萄糖调节蛋白78（glucose-regulated protein 78,GRP78）和内质网应激的未折叠蛋白反应信号通路关键分子蛋白激酶R样内质网激酶（protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase,PERK）、肌醇需求酶1（inositol-requiring enzyme 1,IRE1）、活化转录因子6（... 

【文章来源】：肿瘤. 2020,40(10)北大核心CSCD

【文章页数】：10 页

【部分图文】：

CCK-8检测沉默（A和B）或过表达GPR30(C和D）对Ishikawa和KLE细胞增殖能力的影响

FCM法检测结果(图3)显示,与Control和shRNA-NC组相比,转染shRNA-GPR30-1、shRNA-GPR30-2的Ishikawa和KLE细胞早期凋亡率明显增加(Ishikawa细胞中2条sh RNA对应的t值分别为13.26和11.31,P值均<0.01;KLE细胞中2条shRNA对应的t值分别为30.26和28.19,P值均<0.01),说明沉默GPR30能明显促进Ishikawa和KLE细胞的凋亡能力;感染LV-GPR30的细胞早期凋亡率均比Vector组和Control组明显降低(Ishikawa和KLE细胞中t值分别为9.06和16.45,P值均<0.01),说明过表达GPR30基因能明显抑制Ishikawa和KLE细胞的凋亡能力。2.4 沉默或过表达GPR30对Ishikawa和KLE细胞中GRP78、PERK、IRE1、ATF6 mRNA和蛋白表达水平的影响

实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测结果显示,与Control和shRNA-NC组相比,Ishikawa和KLE细胞转染shRNA-GPR30-1、shRNA-GPR30-2后GRP78、PERK、IRE1、ATF6 mRNA(图4A)和蛋白(图4B)表达水平均明显下调(P值均<0.01)。与之相反,与Vector和Control组相比,Ishikawa和KLE细胞感染LV-GPR30后GRP78、PERK、IRE1、ATF6 mRNA(图4A)和蛋白(图4B)表达水平均明显上调(P值均<0.01)。这一结果说明,沉默GPR30表达可下调子宫内膜癌中GRP78、PERK、IRE1和ATF6的表达,抑制内质网应激途径;而过表达GPR30可上调子宫内膜癌中GRP78、PERK、IRE1和ATF6的表达,激活内质网应激途径。3 讨 论

【参考文献】：
期刊论文
[1]子宫内膜癌组织中G蛋白偶联受体30和葡萄糖调节蛋白78的表达及其临床意义[J]. 叶佳,吕蓓,张阳,张金伟,马锦琪,张俊.  上海医学. 2019(06)
[2]不同子宫内膜癌细胞系中G蛋白耦联受体30mRNA及蛋白表达观察[J]. 叶佳,杨晓清,盛楠,马勤宜,张玉泉.  山东医药. 2016(19)
[3]G蛋白偶联受体30在子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达及亚细胞定位[J]. 叶佳,张沐,马勤宜,徐云钊,张玉泉.  肿瘤. 2011(11)



本文编号：3237837