miR-1271对卵巢癌SKOV3/DDP细胞顺铂耐药的影响及其机制的研究

发布时间：2021-07-06 21:58

　　目的:通过检测卵巢癌SKOV3细胞株和卵巢癌SKOV3/DDP细胞株mi R-1271的表达情况,研究mi R-1271在卵巢癌SKOV3/DDP细胞顺铂耐药形成中的作用。方法:1.采用实时定量PCR方法检测卵巢癌SKOV3/DDP细胞mi R-1271的表达。2.MTT法检测在耐药细胞株中瞬时转染mi R-1271模拟物后卵巢癌SKOV3/DDP细胞对顺铂的IC50。3.运用流式细胞术检测瞬时转染mi R-1271模拟物后SKOV3/DDP细胞对顺铂诱导的凋亡。4.构建XIAP-3’-UTR荧光素酶报告质粒验证mi R-1271的靶基因。5.采用Western blot检测卵巢癌SKOV3/DDP细胞和母代SKOV3细胞中抗凋亡蛋白XIAP表达。检测瞬时转染mi R-1271模拟物后卵巢癌SKOV3/DDP细胞中XIAP的表达。结果:1.mi R-1271在卵巢癌SKOV3/DDP细胞中呈低表达。与母代卵巢癌SKOV3细胞比较,卵巢癌SKOV3/DDP细胞中mi R-1271的表达明显降低（P<0.01）,下调倍数为4.7±0.3。2.在耐药株中上调mi R-1271后显著增加... 

【文章来源】：江苏大学江苏省

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词表
第一章 引言
第二章 研究内容
    2.1 研究目的和意义
    2.2 研究方法、思路
        2.2.1 研究方法
        2.2.2 研究思路
    2.3 技术路线
        2.3.1 miR-1271 在SKOV3及SKOV3/DDP细胞株之间差异表达的研究
        2.3.2 miR-1271 对卵巢癌细胞耐药表型的影响
        2.3.3 miR-1271 调控卵巢癌细胞耐药表型的分子机制研究
第三章 miR-1271 在SKOV3及SKOV3/DDP细胞株之间差异表达的研究
    3.1 实验材料与仪器
        3.1.1 细胞株
        3.1.2 引物
        3.1.3 主要试剂
        3.1.4 主要仪器
        3.1.5 主要溶液的配置
    3.2 实验方法
        3.2.1 细胞的培养与传代
        3.2.2 细胞冻存与复苏
        3.2.3 细胞总RNA提取
        3.2.4 RNA浓度测定
        3.2.5 miRNA的逆转录
        3.2.6 Real-time PCR扩增
        3.2.7 统计分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 卵巢癌SKOV3/DDP细胞和卵巢癌SKOV3中miR-1271 的表达差异
    3.4 讨论
第四章 miR-1271 对卵巢癌细胞耐药表型的影响的研究
    4.1 实验仪器与材料
        4.1.1 细胞株
        4.1.2 寡核苷酸模拟物及对照序列
        4.1.3 主要试剂
        4.1.4 主要仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 细胞转染
        4.2.2 体外药物敏感性实验（MTT）
        4.2.3 流式细胞术检测耐药细胞的凋亡
        4.2.4 统计分析
    4.3 实验结果
        4.3.1 上调miR-1271 对SKOV3/DDP耐药性的影响
        4.3.2 上调miR-1271 对SKOV3/DDP细胞凋亡的影响
    4.4 讨论
第五章 miR-1271 调控卵巢癌细胞耐药表型的分子机制研究
    5.1 实验材料与仪器
        5.1.1 细胞株
        5.1.2 寡核苷酸模拟物及对照序列
        5.1.3 主要试剂
        5.1.4 主要仪器
        5.1.5 各种溶液的配置
    5.2 实验方法
        5.2.1 miR-1271 调控卵巢癌耐药相关靶基因的预测
        5.2.2 荧光素酶实验
        5.2.3 总蛋白提取
        5.2.4 免疫印迹（Western blot）
        5.2.5 统计分析
    5.3 实验结果
        5.3.1 上调miR-1271 对SKOV3/DDP细胞荧光素酶质粒活性的影响
        5.3.2 抗凋亡蛋白XIAP在卵巢癌SKOV3/DDP细胞中的表达
        5.3.3 上调miR-1271 对抗凋亡蛋白XIAP表达水平的影响
    5.4 讨论
第六章 主要结论和展望
    6.1 主要结论
    6.2 展望
参考文献
综述 miRNA与卵巢癌及卵巢癌耐药
    参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表论文及学术交流


【参考文献】：
期刊论文
[1]MicroRNA: a new and promising potential biomarker for diagnosis and prognosis of ovarian cancer[J]. Manish K.Pal,Shyam P.Jaiswar,Vinaya N.Dwivedi,Amit K.Tripathi,Ashish Dwivedi,Pushplata Sankhwar.  Cancer Biology & Medicine. 2015(04)



本文编号：3269046