人子宫内膜干/祖细胞的分离、培养与人子宫内膜细胞异种移植效果观察

发布时间：2021-08-09 17:52

　　背景：子宫内膜的修复、再生与子宫内膜干细胞（hESC）有关，以维持其月经和孕育受精卵的功能。临床上有些疾病也可能与子宫内膜干细胞有关，如子宫内膜异位症（EMS）。有学者提出了EMS的干细胞起源学说，认为经血倒流将子宫内膜干细胞输送到子宫腔以外的地方，这些种子在适宜的微环境下发生粘附、增殖、浸润生长形成病灶。虽然有学者采用裸鼠进行人EMS模型的建立，但由于其免疫功能缺陷,而缺乏代表性。目的：本实验将初步分离人子宫内膜细胞（hEC），并利用人子宫内膜细胞移植于ICR小鼠的一侧子宫浆膜受损区，观察异种移植是否有病灶形成。方法:差速贴壁法和二次筛网法分离子宫内膜上皮和基质细胞，并分别进行低密度和挑克隆传代培养，并用流式细胞仪、免疫组化进行鉴定。将分离的hEC移植在ICR小鼠一侧子宫的浆膜损伤区，对侧子宫作为对照，实验分三组：第一组移植混合传代培养的hEC；第二组移植新鲜消化分离的hEC；第三组移植机械分离至0.5-1mm3大小的新鲜子宫内膜微组织。各组分别在2W、3W、4W处死小鼠。HE染色、免疫组化抗人ERα和CK鉴定，观察hESC在子宫浆膜受损区的定植和局部反应情况。结果：①差速贴壁和二次... 

【文章来源】：福建医科大学福建省

【文章页数】：49 页

【学位级别】：硕士

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lower细胞10x

二次筛网法可以将细胞初步分成上下两部分，滤下去的那部分细胞（简lower）几乎都是单细胞，伴少许细胞微团，细胞贴壁后大多呈梭形，排列呈放射状或漩涡状，生长速度快，24h 增殖一次，细胞微团，贴壁后，未见增殖象，随时间的延长，1w 后开始凋亡（图 1 为 lower 细胞）。上面那部分细（简称 upper）几乎都是细胞团，贴壁后，细胞排列紧密，细胞不增殖，部分细胞 1w后慢慢凋亡（图 2为 upper 细胞）。

有的克隆呈梭形（图3），有的呈椭圆形（图 4）。对大克隆进行挑取转移至 6 孔板培养，细胞生长状态良好，但有椭圆形细胞克隆传至 P6 细胞状态就不好，胞质内出现空泡，细胞轮廓变得模糊，大而扁平（图 5）。梭形细胞克隆传至 P9 也出现上述情况（图 6）。

【参考文献】：
期刊论文
[1]胚胎干细胞移植于内膜损伤小鼠的初步研究[J]. 王燕华,曲军英,吕一帆,江一平.  国际生殖健康/计划生育杂志. 2012(06)
[2]肥大细胞及其配体干细胞因子与EMs研究进展[J]. 邹倩,濮德敏.  国外医学.妇产科学分册. 2006(03)
[3]人子宫内膜碎屑注入小鼠腹腔后种植情况的连续观察[J]. 栾英姿,汤春生,郎景和.  现代妇产科进展. 2002(02)
[4]子宫内膜腺上皮及基质细胞分离、培养作为子宫内膜异位症体外细胞模型的探索[J]. 谭先杰,刘东远,郎景和,沈铿,冷金花,孙大为,朱兰,刘珠凤,许秀英.  现代妇产科进展. 2002(01)

博士论文
[1]子宫内膜异位症体外细胞共培养模型的建立及细胞迁移和侵袭的研究[D]. 董喆.中国协和医科大学 2010



本文编号：3332526