雌激素结合不同受体差异性调控SK0V-3内Sema4D的表达

发布时间：2017-04-29 23:00

  本文关键词：雌激素结合不同受体差异性调控SK0V-3内Sema4D的表达，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：[目的]探讨在人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞株SKOV-3中,雌激素通过结合不同的雌激素受体,差异性调控Sema4D的表达。[方法]1、构建ERα及ER β高表达载体,培养SKOV-3细胞株。将培养好的细胞分为a、b、c三组。a组将ERα过表达载体通过慢病毒感染SKOV-3细胞；b组将ER β过表达载体通过慢病毒感染SKOV-3细胞；c组将未处理的SKOV-3细胞作为对照组。2、慢病毒感染SKOV-3细胞24小时,RT-PCR及Western Blot检测a、b、c三组细胞感染前后ERα、ER βmRNA及蛋白的表达水平。3、慢病毒感染SKOV-3细胞24小时后,Western Blot检测三组细胞Sema4D蛋白的表达水平。4、10-6 mol/L的17-β雌二醇刺激各组细胞24h后,RT-PCR及Western Blot检测a、b、c三组细胞内Sema4D mRNA及蛋白的表达水平。5、先添加100nM的雌激素受体拮抗剂(ICI182,780)处理各组细胞6小时后再添加10-6 mol/L的17-β雌二醇处理12小时,RT-PCR及WesternBlot检测三组细胞内Sema4D mRNA及蛋白表达水平。[结果]1、慢病毒感染SKOV-3细胞24小时后,RT-PCR检测a组细胞ER αmRNA 2-AACt为100.99±5.80较c组9.75±1.01明显升高(P0.01),b组为8.47±0.74,较c组无明显差异(P0.05)。a组ER βRNA 2-△△Cτ为58.45±2.95较c组59.64±4.20无明显差异(P0.05),b组为292.05±12.27,较c组明显升高(P0.01)。2、Western Blot a组细胞ER α/β-actin为100.99±5.80较C组9.75±1.01明显升高(P0.01),b组为8.47±0.74,较c组无明显差异(P0.05)。a组ERβ/β-actin为58.45±2.95较c组59.64±4.20无明显差异(P0.05),b组为292.05±12.27,较c组明显升高(P0.01)。3、Western Blot检测慢病毒感染细胞24h后,各组细胞内Sema4D的表达水平,Sema4D/β-actin分别为0.22±0.02,0.28±0.05,0.26±0.04,差异无统计学意义(P0.05)4、RT-PCR检钡10-6 mol/L 17-β雌二醇刺激c三组细胞24小时后,a组Sema4DmRNA 2-△△Cτ值为21.280±0.745,较c组13.556±2.181明显升高(P0.01),b组为0.000548±0.00009,较c组明显降低(P0.01)。5、Western Blot检测10-6 mol/L 17-β雌二醇刺激三组细胞24小时后,a组细胞内Sema4D/β-actin为0.530±0.085,较c组0.263±0.042明显升高(P0.01),b组内Sema4D/β-actin为0.140±0.046,较c组明显降低(P0.01)。6、RT-PCR及检测(ICI180,782)处理各组细胞后,a、b、c三组细胞内Sema4D mRNA 2-△△Cτ值分别为11.556±2.181,9.548±0.009,10.210±0.632三组对比无明显差异(P0.05)。7、Western Blot检测(ICI180,782)处理各组细胞后a、b、c三组细胞内Sema4D/β-actin值分别为0.303±0.083,0.257±0.061,0.298±0.042,三组对比无明显差异(P0.05)[结论]1、通过慢病毒介导ERα及ERβ过表达载体后感染SKOV-3细胞的方法,我们成功建立了高表达ER α及ER β的卵巢癌细胞株,为后续的研究奠定了基础。2、无雌激素作用时,慢病毒介导过表达载体感染目的细胞不影响Sema4D的表达。3、细胞内高表达ERα,雌激素能够促进细胞内Sema4DmRNA及蛋白的表达。4、细胞内高表达ER β,雌激素能够抑制细胞内Sema4DmRNA及蛋白的表达。5、雌激素受体拮抗剂能够抑制雌激素对Sema4D的调控作用,证明雌激素对Sema4D的差异性调控是由不同的雌激素受体介导的。6、以上结论证实雌激素通过结合不同受体能差异性调控卵巢癌细胞内靶基因Sema4D的表达。也许能为寻找卵巢癌的发病机制提供新的理论依据,也可能为卵巢癌的靶向治疗提供新的思路。
【关键词】：雌激素 雌激素受体α 雌激素受体β 卵巢癌 轴突导向蛋白4D
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 中英文术语对照5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-14
• 材料与方法14-24
• 结果24-30
• 讨论30-34
• 结论34-35
• 参考文献35-39
• 综述39-48
• 参考文献44-48
• 硕士期间发表的文章48-49
• 致谢49

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 吴成,廖秦平;雌激素受体亚型mRNA在子宫内膜癌组织中的表达[J];中国妇产科临床;2003年03期

2 郭瑞霞,魏丽惠,王建六;17β-雌二醇对子宫内膜癌细胞磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号传导通路的活化[J];现代妇产科进展;2005年04期

3 许志锋;李敬来;韩振;冯钢;任明明;;阳离子脂质体介导增强型绿色荧光蛋白质粒转染骨骼肌卫星细胞[J];中国组织工程研究;2013年46期

  本文关键词：雌激素结合不同受体差异性调控SK0V-3内Sema4D的表达，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：335740