ADAM12联合血清学三联在孕中期染色体非整倍体筛查中的应用价值研究
发布时间：2021-08-31 07:53
目的:本课题选择2014年1月～2019年6月在我院进行产前筛查的15992例妊娠孕妇、其中诊断为孕染色体非整倍体胎儿的孕妇58例为研究对象,采用血清学三联指标、染色体核型分析、荧光原位杂交技术、解整合素金属蛋白酶12（ADAM12）联合检测技术,以期优化血清学筛查模式,提高血清学产前筛查的检出率,降低假阴性率,为孕中期染色体非整倍体联合筛查的临床推广应用提供实验依据。方法:（1）应用时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）测定孕14+0～20+6周的孕妇血清中甲胎蛋白（AFP）、游离人绒毛膜促性腺激素β亚基（freeβ-hCG）、游离雌三醇（uE3）浓度水平,应用Lifecycle 4.0软件进行风险评估;根据筛查风险情况及患者自愿原则,行羊水细胞染色体核型分析和（或）羊水间期细胞荧光原位杂交技术进行产前诊断。通过妊娠结局,评价血清学三联在染色体非整倍体筛查中的检出效率;通过比较染色体核型分析与荧光原位杂交结果,证实两种产前诊断方式在产前筛查高危人群中的临床应用价值。（2）收集2014年1月～2019年6月孕周为15+0～2...
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图1两种ADAM12亚型结构示意图
青岛大学硕士学位论文7ThermoBrite原位杂交仪（美国雅培）荧光显微镜（奥林巴斯BX51）2方法2.1血清学三联指标检测2.1.1标本采集抽取孕妇空腹静脉血3ml于自凝管内，置室温30分钟左右，3000rpm离心10分钟分离血清，吸取血清置于微量离心管（吸取血清过程中需注意吸其上清液，防止吸到中间部分的白细胞）。采集的标本置于-4℃保存，应避免反复冻融。溶血和脂血标本均需重新采血。2.1.2测定方法采用全自动时间分辨荧光免疫分析仪一周内检测孕妇血清中AFP、freeβ-hCG、uE3水平，检测结果采用Lifecycle4.0软件结合孕妇年龄、体重、孕周等因素计算得出中位数倍数（MoM），对21-三体综合征、18-三体综合征和开放性神经管缺陷（ONTD）进行风险评估。检测完成后，标本置于-80℃保存。2.1.3检测原理及步骤2.1.3.1检测原理（TRFIA）图2AFP、freeβ-hCG检测原理示意图（直接双抗体夹心法）Fig.2SchematicdiagramofAFPandfreeβ-hCGdetection(directdoubleantibodysandwichmethod)
第一部分孕中期血清学三联在染色体非整倍体筛查中的应用研究8图3uE3检测原理示意图（固相时间分辨荧光免疫法）Fig.3SchematicdiagramofuE3detectionprinciple(solid-phasetime-resolvedfluorescenceimmunoassay)2.1.3.2操作步骤a标准品、质控品复溶b配制微孔板、样本处理器洗液c标准品定标d上机测定2.1.4判断标准正常范围：AFP：0.7～2.5MoM，freeβ-hCG：0.4～2.5MoM，uE3：0.5～2.0MoM。高风险临界值(cut-off值)设定标准：21-三体风险值≥1/270为高风险；18-三体风险值≥1/350为高风险；ONTD高风险为AFPMoM值≥2.5。高风险者建议进一步进行羊膜腔穿刺取羊水，进行羊水细胞培养染色体核型分析和（或）荧光原位杂交检测以明确诊断胎儿是否存在染色体异常。ONTD高风险者定期进行多普勒超声监测。2.2羊水细胞培养2.2.1细胞培养在多普勒超声引导下经腹膜壁行羊膜腔穿刺抽取孕妇羊水25～30ml(弃去最初2ml，以防混有母源细胞)，5ml羊水置于无菌离心管中进行FISH检测，其余注入离心管中做羊水培养，离心后弃去上层清液，取下层悬浊液接种于羊水培养瓶。加入培养液置于37℃5%二氧化碳培养箱培育7d。换液，倒置显微镜下观察培养细胞生长情况，至贴壁细胞生长旺盛即可收获。2.2.2细胞收获、染色体制片低渗、预固定、固定、制片、G显带、染色。
【参考文献】：
期刊论文
[1]荧光原位杂交技术在产前诊断染色体嵌合体中的应用价值[J]. 李显筝,许玲,胡晶晶,黎凤珍,蔡婵慧. 国际生殖健康/计划生育杂志. 2020(02)
[2]孕中期NIPT联合血清AFP、free β-hCG及uE3检测在唐氏综合征筛查的临床价值[J]. 陈志美,杜珍,王定珺. 中国妇产科临床杂志. 2020(01)
[3]2023例遗传咨询者染色体核型遗传效应分析[J]. 王芳,刘晓丹. 中国性科学. 2020(01)
[4]胎儿染色体异常类型与不同种类数量产前诊断指征及孕妇妊娠结局研究[J]. 庞霞,白艳霞. 山西医药杂志. 2019(24)
[5]11468例孕妇妊娠中期血清学产前筛查分析[J]. 郑尾珍,陈小婷. 中国卫生检验杂志. 2019(24)
[6]血清生化标志物联合超声用于唐氏综合征产前筛查的价值[J]. 周平安,石秀英,刁杰,张小斌,闫娟. 中国计划生育学杂志. 2019(12)
[7]孕中期血清学指标产前筛查对胎儿染色体异常及妊娠结局的指导意义[J]. 周伟丽,柴霖,耿淑敏. 中国妇幼保健. 2019(19)
[8]两种唐氏综合征产前筛查方法的效果比较分析[J]. 盛兰曦,滕彦玲. 当代医学. 2019(24)
[9]产前无创筛查与唐氏筛查在孕中期临床应用中的总结分析[J]. 樊华,刘丽,刘爽. 中国妇幼保健. 2019(15)
[10]孕中期血清学产前筛查在出生缺陷防控中的临床价值[J]. 童飞,黄卫彤,王宗杰. 中国医药导报. 2019(21)
博士论文
[1]苍柏祛痛胶囊药效学研究和质量控制体系建立[D]. 吴晶.甘肃农业大学 2018
硕士论文
[1]不同产前筛查方案对胎儿染色体异常检出效率的比较[D]. 郭颖.苏州大学 2019
[2]ADAM12、Perilipin及Chemerin与妊娠期糖尿病的相关性研究[D]. 宋亚晶.华北理工大学 2018
[3]稽留流产患者与正常早孕ADAM12、IGF-Ⅱ的对比研究[D]. 张杰.山西医科大学 2014
本文编号：3374515
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图1两种ADAM12亚型结构示意图
青岛大学硕士学位论文7ThermoBrite原位杂交仪（美国雅培）荧光显微镜（奥林巴斯BX51）2方法2.1血清学三联指标检测2.1.1标本采集抽取孕妇空腹静脉血3ml于自凝管内，置室温30分钟左右，3000rpm离心10分钟分离血清，吸取血清置于微量离心管（吸取血清过程中需注意吸其上清液，防止吸到中间部分的白细胞）。采集的标本置于-4℃保存，应避免反复冻融。溶血和脂血标本均需重新采血。2.1.2测定方法采用全自动时间分辨荧光免疫分析仪一周内检测孕妇血清中AFP、freeβ-hCG、uE3水平，检测结果采用Lifecycle4.0软件结合孕妇年龄、体重、孕周等因素计算得出中位数倍数（MoM），对21-三体综合征、18-三体综合征和开放性神经管缺陷（ONTD）进行风险评估。检测完成后，标本置于-80℃保存。2.1.3检测原理及步骤2.1.3.1检测原理（TRFIA）图2AFP、freeβ-hCG检测原理示意图（直接双抗体夹心法）Fig.2SchematicdiagramofAFPandfreeβ-hCGdetection(directdoubleantibodysandwichmethod)
第一部分孕中期血清学三联在染色体非整倍体筛查中的应用研究8图3uE3检测原理示意图（固相时间分辨荧光免疫法）Fig.3SchematicdiagramofuE3detectionprinciple(solid-phasetime-resolvedfluorescenceimmunoassay)2.1.3.2操作步骤a标准品、质控品复溶b配制微孔板、样本处理器洗液c标准品定标d上机测定2.1.4判断标准正常范围：AFP：0.7～2.5MoM，freeβ-hCG：0.4～2.5MoM，uE3：0.5～2.0MoM。高风险临界值(cut-off值)设定标准：21-三体风险值≥1/270为高风险；18-三体风险值≥1/350为高风险；ONTD高风险为AFPMoM值≥2.5。高风险者建议进一步进行羊膜腔穿刺取羊水，进行羊水细胞培养染色体核型分析和（或）荧光原位杂交检测以明确诊断胎儿是否存在染色体异常。ONTD高风险者定期进行多普勒超声监测。2.2羊水细胞培养2.2.1细胞培养在多普勒超声引导下经腹膜壁行羊膜腔穿刺抽取孕妇羊水25～30ml(弃去最初2ml，以防混有母源细胞)，5ml羊水置于无菌离心管中进行FISH检测，其余注入离心管中做羊水培养，离心后弃去上层清液，取下层悬浊液接种于羊水培养瓶。加入培养液置于37℃5%二氧化碳培养箱培育7d。换液，倒置显微镜下观察培养细胞生长情况，至贴壁细胞生长旺盛即可收获。2.2.2细胞收获、染色体制片低渗、预固定、固定、制片、G显带、染色。
【参考文献】：
期刊论文
[1]荧光原位杂交技术在产前诊断染色体嵌合体中的应用价值[J]. 李显筝,许玲,胡晶晶,黎凤珍,蔡婵慧. 国际生殖健康/计划生育杂志. 2020(02)
[2]孕中期NIPT联合血清AFP、free β-hCG及uE3检测在唐氏综合征筛查的临床价值[J]. 陈志美,杜珍,王定珺. 中国妇产科临床杂志. 2020(01)
[3]2023例遗传咨询者染色体核型遗传效应分析[J]. 王芳,刘晓丹. 中国性科学. 2020(01)
[4]胎儿染色体异常类型与不同种类数量产前诊断指征及孕妇妊娠结局研究[J]. 庞霞,白艳霞. 山西医药杂志. 2019(24)
[5]11468例孕妇妊娠中期血清学产前筛查分析[J]. 郑尾珍,陈小婷. 中国卫生检验杂志. 2019(24)
[6]血清生化标志物联合超声用于唐氏综合征产前筛查的价值[J]. 周平安,石秀英,刁杰,张小斌,闫娟. 中国计划生育学杂志. 2019(12)
[7]孕中期血清学指标产前筛查对胎儿染色体异常及妊娠结局的指导意义[J]. 周伟丽,柴霖,耿淑敏. 中国妇幼保健. 2019(19)
[8]两种唐氏综合征产前筛查方法的效果比较分析[J]. 盛兰曦,滕彦玲. 当代医学. 2019(24)
[9]产前无创筛查与唐氏筛查在孕中期临床应用中的总结分析[J]. 樊华,刘丽,刘爽. 中国妇幼保健. 2019(15)
[10]孕中期血清学产前筛查在出生缺陷防控中的临床价值[J]. 童飞,黄卫彤,王宗杰. 中国医药导报. 2019(21)
博士论文
[1]苍柏祛痛胶囊药效学研究和质量控制体系建立[D]. 吴晶.甘肃农业大学 2018
硕士论文
[1]不同产前筛查方案对胎儿染色体异常检出效率的比较[D]. 郭颖.苏州大学 2019
[2]ADAM12、Perilipin及Chemerin与妊娠期糖尿病的相关性研究[D]. 宋亚晶.华北理工大学 2018
[3]稽留流产患者与正常早孕ADAM12、IGF-Ⅱ的对比研究[D]. 张杰.山西医科大学 2014
本文编号：3374515
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