TP63基因启动子DNA甲基化与宫颈癌的相关性研究
发布时间：2021-09-11 20:44
目的探讨不同病理子宫颈组织TP63基因启动子区的DNA甲基化状态,TP63、survivin和RUNX2的表达以及RUNX2在两组子宫颈组织中TP63基因启动子DNA甲基化特异位点的结合情况,统计分析宫颈癌组织中TP63基因启动子DNA甲基化状态与临床病理参数之间的关系。方法选取2015年9月～2018年9月唐山市工人医院收治的因宫颈病变及其他良性疾病行手术治疗的标本共85例,严格按照标本的纳入及排除标准进行选取,所有标本均由实验人员与医院病理科医师共同确认病理分级和类型,其中宫颈癌患者40例（CC）和因子宫良性病变行全子宫切除术的患者45例（Control）宫颈组织。采用全基因组DNA甲基化分析（WGBS）和RNA sequence联合筛查CC和年龄相匹配的Control组织（各3例）的DNA甲基化度和m RNA表达;采用亚硫酸氢盐测序法（BSP）和实时定量PCR（q PCR）方法检测TP63基因启动子区DNA甲基化和RUNX2、TP63、survivin的m RNA表达;采用染色质免疫共沉淀技术（CHIP）检测RUNX2在宫颈组织中与TP63基因启动子的结合情况,并分析TP63基因...
【文章来源】：华北理工大学河北省
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
TP63基因启动子CpG位点甲基化状态注：每个表示20%甲基化，表示未甲基化
-16-330、-505、-535、-688、-888、-892CpG）甲基化率分别为：27.3%、63.2%、66.6%、42.7%、100%、47.7%、71.9%，相应的正常宫颈组织中TP63基因启动子区各位点甲基化率分别为：6.7%、31.2%、27.5%、25.7%、48.8%、31.4%、22.6%，其中-688CpG位点甲基化率最高，见图3。图3TP63基因启动子CpG位点甲基化状态注：每个表示20%甲基化，表示未甲基化。1.4.3人宫颈组织的RNA-seq检测及qPCR验证RNA-seq结果分层聚类分析显示，与Control相比，在宫颈鳞癌（CC）中RUNX2、survivin表达上调，而TP63基因表达下调，不同颜色表示基因表达水平的差异，颜色深浅表示基因表达的强度。采用qPCR方法对芯片检测结果中的2个上调基因、1个下调基因进行验证，结果显示，与Control相比，在CC组织中survivin（2.86±0.44）和RUNX2（2.68±0.32）的mRNA表达均显著上调；而TP63（0.45±0.12）mRNA表达均显著下调，差异均有统计学意义（P<0.05）。图4宫颈组织基因芯片测序及qPCR验证结果注：Control表示正常宫颈组织，CC表示宫颈鳞癌组织，*表示与Control组比较P<0.05。
-17-1.4.4BSP法检测宫颈组织中TP63基因的DNA甲基化度BSP检测结果显示，CC组织和Control组织中TP63各位点（-319、-330、-505、-535、-688、-888、-892CpG）的甲基化率检测结果见表4，其中-688CpG位点在两组中DNA甲基化水平比较，差异有统计学意义（P＜0.05），提示CC组织中TP63基因启动子区-688CpG位点发生高度甲基化。表4两组宫颈组织中TP63基因启动子甲基化率的比较组别N-319(n,%)-330(n,%)-505(n,%)-535(n,%)-688(n,%)-888(n,%)-892(n,%)Control4512（26.7）11（24.4）11（24.4）11（24.4）14（31.1）10（22.2）10（22.2）CC4017（42.5）19（47.5）18（45）18（45）31（77.5）22（55）19（47.5）Χ2值0.7401.7441.3951.3954.8103.5632.258P值0.3900.1870.2380.2380.0280.0590.1331.4.5TP63基因启动子区生物信息学分析通过在线软件TFSEARCH发现TP63基因启动子区可能包含4个RUNX2转录因子结合域（RUNX2结合序列为TGTGGTT），其中-688CpG位点甲基化与RUNX2结合序列重合，提示该位点DNA甲基化可能影响RUNX2介导的TP63基因的表达（见图5）。图5TP63基因启动子区与转录因子RUNX2结合位点预测
【参考文献】：
期刊论文
[1]非肌层浸润性膀胱癌术后辅助热灌注化疗的研究进展[J]. 黄小龙,张思州,温鹏. 检验医学与临床. 2019(16)
[2]下咽部鳞状细胞癌患者人乳头瘤病毒感染及p53蛋白表达的检测分析[J]. 魏炜,宋蕴韬,徐国辉,肖康,石琦. 中华实验和临床病毒学杂志. 2018 (06)
[3]预防性人乳头状瘤病毒疫苗及其接种建议[J]. 王绍恒,周平玉. 上海医药. 2018(23)
[4]女性下生殖道HPV感染与宫颈上皮内瘤变及宫颈癌关系的探讨[J]. 陈辉. 世界最新医学信息文摘. 2018(55)
[5]携带TAp63的双靶向溶瘤腺病毒抑制结肠癌干细胞生长[J]. 罗颀枫,杜敏,代镇岭,付正伟,张振宇,Shiva Basnet,葛海燕. 外科研究与新技术. 2018(02)
[6]线粒体DNA表观遗传学研究新进展[J]. 高剑基,张文娟,杨杏芬. 毒理学杂志. 2018(03)
[7]hedgehog信号通路拮抗剂GANT61对子宫颈癌裸鼠移植瘤生长的作用及其机制[J]. 常亚男,陈红,段洁,杨红,李盼盼,李玲玲. 中华妇产科杂志. 2018 (05)
[8]下咽癌的临床特点 手术效果及预后影响因素[J]. 赵冉,张磊. 安徽医学. 2018(04)
[9]DNA甲基化及重亚硫酸盐测序法在药用植物中的应用策略[J]. 邢朝斌,张妍彤,王卓,宋菊,龙月红. 中草药. 2017(24)
[10]循环肿瘤细胞在肿瘤侵袭转移机制中的研究进展及应用前景[J]. 郑建洲,何流漾,夏蕾,王勇,杨明夏. 国际遗传学杂志. 2017 (06)
博士论文
[1]胱抑素C与膀胱尿路上皮肿瘤的临床病理特征的相关性分析[D]. 王辉.山东大学 2018
[2]脂肪干细胞微环境对衰老成纤维细胞作用及机制的研究[D]. 申霄.重庆医科大学 2016
硕士论文
[1]黄芩素对宫颈癌细胞中NF-kB及其下游靶基因表达的影响[D]. 李俊博.延边大学 2017
[2]ΔNp63α对下咽鳞状细胞癌上皮—间质转化的作用研究[D]. 周梦燕.第二军医大学 2017
[3]纳米生物探针的制备及DNA损伤检测应用[D]. 张林群.东南大学 2016
[4]应用竞争风险模型探索宫颈癌患者的预后影响因素[D]. 郭胜楠.南方医科大学 2016
[5]N-cadherin、E-cadherin和p63在宫颈癌中的表达及相关性[D]. 江文静.安徽医科大学 2013
[6]Bmi-1、Bcl-2、Survivin在宫颈癌组织中的表达及意义[D]. 高巧玲.郑州大学 2010
[7]下咽癌的外科治疗[D]. 李佳丽.河北医科大学 2010
[8]Maspin和TAp63在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义[D]. 方登攀.华中科技大学 2006
本文编号：3393690
【文章来源】：华北理工大学河北省
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
TP63基因启动子CpG位点甲基化状态注：每个表示20%甲基化，表示未甲基化
-16-330、-505、-535、-688、-888、-892CpG）甲基化率分别为：27.3%、63.2%、66.6%、42.7%、100%、47.7%、71.9%，相应的正常宫颈组织中TP63基因启动子区各位点甲基化率分别为：6.7%、31.2%、27.5%、25.7%、48.8%、31.4%、22.6%，其中-688CpG位点甲基化率最高，见图3。图3TP63基因启动子CpG位点甲基化状态注：每个表示20%甲基化，表示未甲基化。1.4.3人宫颈组织的RNA-seq检测及qPCR验证RNA-seq结果分层聚类分析显示，与Control相比，在宫颈鳞癌（CC）中RUNX2、survivin表达上调，而TP63基因表达下调，不同颜色表示基因表达水平的差异，颜色深浅表示基因表达的强度。采用qPCR方法对芯片检测结果中的2个上调基因、1个下调基因进行验证，结果显示，与Control相比，在CC组织中survivin（2.86±0.44）和RUNX2（2.68±0.32）的mRNA表达均显著上调；而TP63（0.45±0.12）mRNA表达均显著下调，差异均有统计学意义（P<0.05）。图4宫颈组织基因芯片测序及qPCR验证结果注：Control表示正常宫颈组织，CC表示宫颈鳞癌组织，*表示与Control组比较P<0.05。
-17-1.4.4BSP法检测宫颈组织中TP63基因的DNA甲基化度BSP检测结果显示，CC组织和Control组织中TP63各位点（-319、-330、-505、-535、-688、-888、-892CpG）的甲基化率检测结果见表4，其中-688CpG位点在两组中DNA甲基化水平比较，差异有统计学意义（P＜0.05），提示CC组织中TP63基因启动子区-688CpG位点发生高度甲基化。表4两组宫颈组织中TP63基因启动子甲基化率的比较组别N-319(n,%)-330(n,%)-505(n,%)-535(n,%)-688(n,%)-888(n,%)-892(n,%)Control4512（26.7）11（24.4）11（24.4）11（24.4）14（31.1）10（22.2）10（22.2）CC4017（42.5）19（47.5）18（45）18（45）31（77.5）22（55）19（47.5）Χ2值0.7401.7441.3951.3954.8103.5632.258P值0.3900.1870.2380.2380.0280.0590.1331.4.5TP63基因启动子区生物信息学分析通过在线软件TFSEARCH发现TP63基因启动子区可能包含4个RUNX2转录因子结合域（RUNX2结合序列为TGTGGTT），其中-688CpG位点甲基化与RUNX2结合序列重合，提示该位点DNA甲基化可能影响RUNX2介导的TP63基因的表达（见图5）。图5TP63基因启动子区与转录因子RUNX2结合位点预测
【参考文献】：
期刊论文
[1]非肌层浸润性膀胱癌术后辅助热灌注化疗的研究进展[J]. 黄小龙,张思州,温鹏. 检验医学与临床. 2019(16)
[2]下咽部鳞状细胞癌患者人乳头瘤病毒感染及p53蛋白表达的检测分析[J]. 魏炜,宋蕴韬,徐国辉,肖康,石琦. 中华实验和临床病毒学杂志. 2018 (06)
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[4]女性下生殖道HPV感染与宫颈上皮内瘤变及宫颈癌关系的探讨[J]. 陈辉. 世界最新医学信息文摘. 2018(55)
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[6]线粒体DNA表观遗传学研究新进展[J]. 高剑基,张文娟,杨杏芬. 毒理学杂志. 2018(03)
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[8]下咽癌的临床特点 手术效果及预后影响因素[J]. 赵冉,张磊. 安徽医学. 2018(04)
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[10]循环肿瘤细胞在肿瘤侵袭转移机制中的研究进展及应用前景[J]. 郑建洲,何流漾,夏蕾,王勇,杨明夏. 国际遗传学杂志. 2017 (06)
博士论文
[1]胱抑素C与膀胱尿路上皮肿瘤的临床病理特征的相关性分析[D]. 王辉.山东大学 2018
[2]脂肪干细胞微环境对衰老成纤维细胞作用及机制的研究[D]. 申霄.重庆医科大学 2016
硕士论文
[1]黄芩素对宫颈癌细胞中NF-kB及其下游靶基因表达的影响[D]. 李俊博.延边大学 2017
[2]ΔNp63α对下咽鳞状细胞癌上皮—间质转化的作用研究[D]. 周梦燕.第二军医大学 2017
[3]纳米生物探针的制备及DNA损伤检测应用[D]. 张林群.东南大学 2016
[4]应用竞争风险模型探索宫颈癌患者的预后影响因素[D]. 郭胜楠.南方医科大学 2016
[5]N-cadherin、E-cadherin和p63在宫颈癌中的表达及相关性[D]. 江文静.安徽医科大学 2013
[6]Bmi-1、Bcl-2、Survivin在宫颈癌组织中的表达及意义[D]. 高巧玲.郑州大学 2010
[7]下咽癌的外科治疗[D]. 李佳丽.河北医科大学 2010
[8]Maspin和TAp63在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义[D]. 方登攀.华中科技大学 2006
本文编号：3393690
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