CDC25B/CDC2信号通路抑制剂FX01抑制卵巢癌细胞增殖和迁移

发布时间：2021-10-01 06:46

　　背景与目的:卵巢癌是死亡率最高的妇科肿瘤,卵巢癌的临床一线化疗药物为铂类和紫杉醇,然而铂类和紫杉醇经常诱发耐药,最终肿瘤出现复发和转移,所以开发新的化疗药物作为铂类和紫杉醇耐药后的候选药物已成为临床上卵巢癌治疗的迫切需求。细胞周期蛋白CDC25B高表达于包括卵巢癌在内的多种肿瘤中,并与临床预后不良相关。本研究以CDC25B为靶点,筛选获得其小分子化合物抑制剂,并研究其作为卵巢癌靶向治疗药物的潜力。研究方法:采用Western Blot法检测FX01对CDC25B蛋白水平及其下游信号蛋白CDC2（即CDK1）的表达和磷酸化水平的影响。采用qRT-PCR法检测FX01对CDC25B mRNA转录水平的影响。采用MTS法检测FX01对卵巢癌细胞系和原代卵巢癌细胞增殖能力的影响。采用PI染色法检测FX01诱导卵巢癌细胞周期阻滞的功效。采用Annexin V和PI双染法,检测FX01诱导卵巢癌细胞凋亡的功效。结果:1)小分子化合物FX01可靶向抑制CDC25B的表达,并进一步抑制其下游信号分子CDC2的活化。CDC2的失活导致卵巢癌细胞的周期进展阻滞于G2/M期。2)FX01可有效抑制卵巢癌细胞... 

【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

CDC25B的表达与卵巢癌患者预后不良相关

图 2. FX01 抑制 CDC25B/CDC2 信号通路的活化。A， 5 μM FX01 作用 SKOV3 细胞24 h，qRT-PCR 检测 CDC25B 的 mRNA 转录水平。**，p < 0.01。B，不同浓度的 FX01处理 SKOV3 细胞 24 h，Western Blot 法检测 CDC25B 和 CDC2 的蛋白表达水平，以及CDC2 的 Tyr15 酪氨酸残基磷酸化水平。PI3K 抑制剂 LY294002 为阴性对照。GAPDH 为内参基因。3.2 FX01 诱导卵巢癌细胞周期阻滞快速分裂是肿瘤细胞的一大属性，抑制肿瘤细胞的细胞周期进展，可有效杀伤肿瘤细胞。通过检测 FX01 对卵巢癌细胞周期进展的影响，结果表明（图 3），5 μM FX01 在作用 6 h 时就已表现出周期抑制的功能。FX0

图 3. FX01 诱导卵巢癌细胞周期阻滞于 G2/M 期。SKOV3（A 和 B）或 ES2（C 和 细胞经 FX01 处理 6 h、12 h 或 24 h 后，用 PI 染色，于流式细胞仪中检测细胞周期布。A 和 C 为代表图，C 和 D 为统计图。3.3 FX01 抑制卵巢癌细胞系和原代细胞的增殖通过检测 FX01 对卵巢癌细胞增殖抑制的 IC50，可反应其对肿瘤细的相对杀伤能力。研究结果表明（图 4 和表 1），FX01 抑制卵巢癌细系 SKOV3（图 4 A）、ES2 （图 4 B）、IGROV1（图 4 C）、MCAS（图 4 D和 HO8910PM（图 4 E），以及卵巢癌原代肿瘤细胞 CZ001（图 4 G）、CZ0（图 4 H）和 CZ008（图 4 I）的 IC50均小于 5 μM。FX01 对正常卵巢上

【参考文献】：
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本文编号：3417357