基于滋养层细胞的ER-LDA检测方法的建立、鉴定及其在地中海贫血无创产前诊断中的初步应用研究

发布时间：2021-11-01 07:48

　　研究背景与目的母体产道中的脱落胎儿细胞由于含有完整的细胞结构以及胎儿的整套基因组信息,而在非整倍体疾病、染色体微缺失、单基因性疾病以及新生儿溶血病等遗传性疾病的无创产前诊断中发挥着重要的作用。然而,脱落胎儿细胞的分离与鉴定仍缺乏快速、有效的检测方法;此外,目前尚缺乏对这些稀有细胞进行充分的胎源性验证;另外,目前这些稀有胎儿细胞在单基因性疾病的产前诊断应用仍需探究。因此,在本课题中,我们将建立一种快速、简便、有效的方法,用于脱落滋养层细胞的鉴定与分离;同时,我们将单细胞分离的胎儿细胞进行深入的、多位点的胎源性验证;在第三部分中,我们还将这些稀有细胞运用于地中海贫血的产前诊断中,并通过高通量测序分析,从而评估其在地中海贫血等单基因性疾病中的应用。研究方法1.通过ddPCR与qPCR评估脱落胎儿细胞的数目;通过显微镜荧光定量与流式细胞术等评估滋养层细胞与母体细胞差异,建立脱落滋养层细胞新型鉴定方法（内质网染色结合线性判别分析,ER-LDA）;评估ER-LDA在细胞系模型与临床标本中的检测效果。2.通过单细胞分离,获取滋养层单细胞;通过免疫荧光分析脱落滋养层细胞的蛋白标志物表达情况;通过荧光原... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：142 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１－２脱落细胞样本进行免疫荧光鉴定

?第一章新型滋养层细胞鉴定方法ＥＲ－ＬＤＡ的建立???Ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ?ｃｅｌｌ?Ｃｅｒｖｉｃａｌ?ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?ｃｅｌｌ?調??■Ｈ?ｐＤＩＡ３??七一?Ｉ：．．．：＇＇Ｑ?ＲＲＢＰ１??ＣＹＰ５１Ａ１??ｆｌ■■隱?１??「■画醒?ＰＳＭＤ１??ｊ１－■■麵一?ＰＳＭＤ２??ＰＲＫＣＳＨ??ＲＰＮ１??ＫＴＮ１?????ＣＡＬＲ??ＢＣＡＰ３１??ｉ？ＨＳＥＣ６ｌＢ??■?ＲＰＮ２??Ｓ?ＨＳＰ９０Ｂ１??ＣＡＮＸ??ＤＤＯＳＴ??１?■■■■■Ｈｕｍｕｍｎｉ?ｐ４ｈｂ??ｃ／ＶＶ％，??图１－３滋养层细胞中ＥＲ相关的基因表达升高。通过ＭＥＲＡＶ数据，分析与ＥＲ活性或功能??相关的基因在滋养层细胞与宫颈上皮细胞中的表达量，结果显示与宫颈上皮细胞相比，大部??分ＥＲ相关的基因在滋养层细胞中表达升高。??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３．?ＥＲ－ｒｅｌａｔｅｄ?ｇｅｎｅｓ?ａｒｅ?ｈｉｇｌｉｌｙ?ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ?ｉｎ?ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ?ｃｅｌｌｓ．?Ｂａｓｅｄ?ｏｎ?ｐｕｂｌｉｃｌｙ??ａｖａｉｌａｂｌｅ?ｄａｔａ?ｂａｓｅ，?ＭＥＲＡＶ，?ｔｈｅ?ｈｅａｔｍａｐ?ｓｈｏｗｓ?ｔｌｉａｔ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ＥＲ－ｒｅｌａｔｅｄ?ｇｅｎｅｓ?ｉｓ??ｈｉｇｈｅｒ?ｔｈａｎ?ｔｈａｔ?ｏｆ?ｃｅｍｃａｌ?ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?ｃｅｌｌｓ．??２８??

?博士学位论文???Ａ?１０］?１?巳?８－１???＇／?／?聲?／?／?／?＾??／??ｑ?Ｄ?Ｅ＾ＴＹａｃｋｅｒ?ＣＦＤ＾Ｅ??ＥＲ－ｔｒａｃｋｅｒ?ＤＡＰＩ?Ｂｒｉｇｈｔ?ｆｉｅｌｄ?Ｍｅｒｇｅ??■參■■■??ＢｎａｈＵｉｅｌｄ??ＨＢ?議讓．：：．ｅ??瞧倫。??１＾１?：?Ａ??■■＿Ｈ?ｌ?ｉ??■■■■??■?Ｗｈｉｔｅ?ｂｌｏｏｄ?ｃｅｌｌｓ??０?１０３?１０４?１０５??Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ??图１－４滋养层细胞与鳞状上皮细胞、白细胞的ＥＲ荧光强度分析。（Ａ）滋养层细胞与鱗状??上皮细胞的荧光差异分析。（Ｂ）滋养层细胞与白细胞的荧光差异分析。（Ｃ）共聚焦显微镜??分析滋养层细胞与鱗状上皮细胞、白细胞的ＥＲ荧光强度差异。（Ｄ）ＣＦＤＡ－ＳＥ预标的滋养??层细胞掺入Ｐａｐ标本中进汙ＥＲ染色分析。白色箭头指示的是滋养层细胞，黄色箭头指示的??是鱗状上皮细胞。（Ｅ）流式细胞术分析滋养层细胞Ｕ鱗状上皮细胞、白细胞的ＥＲ荧光差异。??Ｆｉｇｕｒｅ?１－４．?Ｔｈｅ?ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ?ｏｆ?ＥＲ－ｔｒａｃｋｅｒ?ｉｎ?ｔｈｒｅｅ?ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ?ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅｓ，??ＨＴＲ８－Ｓ／Ｖｎｅｏ，?ＪＥＧ－３，?ａｎｄ?ＪＡＲ，?ａｎｄ?ｉｎ?ｓｑｕａｍｏｕｓ?ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?ｃｅｌｌｓ?ａｎｄ?ｗｈｉｔｅ?ｂｌｏｏｄ?ｃｅｌｌｓ?ｔａｋｅｎ?ｆｒｏｍ??ｈｅａｌｔｈｙ?ｆｅｍａｌｅ?ｄｏｎｏｒｓ?（Ａ，?Ｂ）．?（Ｃ）?Ｃｅｌｌｓ?ａｒｅ?ｓｔａｉｎｅｄ?ｗｉｔｈ?ＥＲ－Ｔｒａｃｋｅｒ?Ｒｅｄ?ａ


本文编号：3469789