microRNA-200b在盆腔器官脱垂患者子宫旁骶韧带成纤维细胞中的表达及意义

发布时间：2021-12-19 07:12

　　背景:盆腔器官脱垂（pelvic organ prolapse,POP）是指盆腔器官脱出于阴道内或阴道外,严重影响患者生活质量。POP是一种多病因疾病,如阴道分娩次数、年龄、体重指数等均被认为与POP的发生相关。基因缺陷导致盆底细胞外基质结构及功能异常是女性POP发生发展的重要分子基础。胶原纤维和弹力纤维作为细胞外基质的重要组成部分,以筋膜、韧带等形式给予盆底组织抗拉伸强度,在维持盆底器官正常位置和功能中发挥重要作用。盆底韧带和筋膜主要细胞是成纤维细胞。微小RNA（microRNA,miRNA）为长度约19-22个核苷酸的非编码RNA,在转录后调控基因表达。miR-200b已被确认参与多种纤维化疾病,如肺纤维化、肾脏纤维化和心脏纤维化等。目的:探讨microRNA-200b在体外原代及传代培养的盆腔器官脱垂患者子宫旁骶韧带成纤维细胞中的表达,进而为盆腔器官脱垂的发病机制和未来的治疗提供可行的理论基础与方法指导。方法:1.收集因盆腔器官脱垂（根据盆腔脱垂定量分期法II期或以上）行子宫切除术患者的子宫旁骶韧带标本10例作为实验组,收集无盆腔器官脱垂行子宫切除术患者子宫旁骶韧带标本10例作为... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：38 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

对照组与实验组人子宫旁骶韧带成纤维细胞生长状态（倒置相差显微镜×100）1

结果9结果1成纤维细胞形态学观察对照组与实验组种植同数量细胞培养15天后，观察贴壁的人子宫旁骶韧带成纤维细胞多呈长梭形，彼此连接密集排列，呈旋涡状或放射状排列，境界清楚，胞体较大，胞质透明，细胞核较大，多呈椭圆形，与正常子宫旁骶韧带成纤维细胞相比，盆腔器官脱垂子宫旁骶韧带成纤维细胞数量较少，较稀疏。(结果如图1所示)图1对照组与实验组人子宫旁骶韧带成纤维细胞生长状态（倒置相差显微镜×100）12细胞的免疫组化鉴定波形蛋白（Vimentin）染色结果示，倒置相差显微镜下观察，围绕细胞核周围呈现棕黄色颗粒状，定位于胞质内，细胞核不染色，呈蓝色，证明为成纤维细胞。（结果如图2所示）图2人子宫旁骶韧带成纤维细胞免疫组化染色（倒置相差显微镜×400）21图A为正常子宫旁骶韧带成纤维细胞，图B为盆腔器官脱垂子宫旁骶韧带成纤维细胞。2图A为正常子宫旁骶韧带成纤维细胞，图B为盆腔器官脱垂子宫旁骶韧带成纤维细胞。ABAB

青岛大学硕士学位论文103细胞的免疫荧光鉴定由于成纤维细胞高表达Vimentin，我们在激光共聚焦显微镜下观察结果显示，在成纤维细胞的胞浆中，可见Vimentin阳性的细胞发出弥漫性强绿色荧光，证明我们所培养的细胞为成纤维细胞，再通过DAPI染细胞核可以计算总的细胞数。（结果如图3所示）图3人子宫旁骶韧带成纤维细胞免疫荧光染色（激光共聚焦显微镜×400）34实验组与对照组相关特征比较我们对实验组及正常对照组在年龄、体重指数、盆腔器官脱垂家族史人数比例、绝经期人数比例及正常自然分娩情况之间采用相关统计学方法比较差异无统计学意义（P均>0.05）,说明这20例样本组间匹配良好，具有可比性。结果如下表6所示。表6实验组与对照组患者相关临床特征比较相关特征实验组对照组P（n=10）（n=10）年龄51.40±3.8149.30±3.500.215体重指数24.85±1.7824.09±1.880.362盆腔器官脱垂家族史（人数（%））3（30.00）1（10.0）0.582绝经期（人数（%））5（50.00）3（30.00）0.650正常自然分娩数1.70±0.671.30±0.650.2025两组患者miR-200b基因表达量比较我们获得的溶解曲线为单峰曲线，记录两组实验样本miR-200b与U6对应的Ct值，进行计算，使用2-△△Ct来表示miR-200b基因在实验组与对照组中的表达差异，2-△△Ct〉1，表示miRNA的表达水平上调，反之，2-△△Ct〈1，表示miRNA的表达水平下调。我们的实验结果表明，盆腔器官脱垂患者子宫旁骶韧带成纤维细胞与非盆腔器官脱垂患者子宫旁骶韧带成纤维细胞相比，2-△△Ct〉1，表示表达水平上调，且P〈0.01，3图A正常子宫旁骶韧带成纤维细胞，图B为盆腔器官脱垂子宫旁骶韧带成纤维细胞。AB


本文编号：3543990