EGCG通过调节mTOR途径下游S6K1和4E-BP1因子抑制宫颈癌HeLa细胞分生

发布时间：2017-05-25 19:04

  本文关键词：EGCG通过调节mTOR途径下游S6K1和4E-BP1因子抑制宫颈癌HeLa细胞分生，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：mTOR (mammalian target of rapamycin雷帕霉素靶蛋白)是一种丝／苏氨酸蛋白激酶,在细胞生长、增殖、分化、细胞周期调控等多个方面起到了重要作用。其信号通路参与调节与肿瘤密切相关的多项细胞功能,是近年来肿瘤研究的热点,其中E-BP1(eukaryotic translation initiation factor4E binding protein1真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1)和S6K1(Ribosomal protein S6kinase beta-1核糖体S6蛋白激酶1)是研究的热点,也是mTOR最具特色的底物。EGCG(表没食子儿茶素没食子酸酯,Epigallo catechin-3-gallate)是茶叶中的主要活性成分,它作为茶树自身的天然产物,具有抗氧化,清除自由基等功能,对人体健康和长寿具有重要意义。 本研究旨在探讨EGCG体外抑制宫颈癌HeLa细胞分生及其机制,深刻揭示喝茶的保健机理,为EGCG作为保健药品的开发和利用奠定理论基础。实验在形态观察的基础上,采用CellTiter-Blue法检测EGCG (0μM、10μM、25μM、50μM和100μM)处理HeLa细胞之后,HeLa细胞的生长曲线；流式细胞术检测EGCG处理对HeLa细胞周期的影响,观察EGCG对HeLa细胞分生的抑制作用；采用Western-blotting法检测了mTOR下游底物S6K1和4E-BP1蛋白的表达水平。 实验结果显示,在低营养(0.5%牛血清)培养下,EGCG对HeLa细胞分生具有抑制作用,并呈浓度依赖效应,随着EGCG浓度的增加HeLa细胞周期被阻滞于S期和G2/M,4E-BP1蛋白水平随着EGCG的浓度增加而显著下降(25μM和50μM的EGCG处理：p0.05,100μM EGCG处理：p0.01,极其显著)。而在高营养(10%牛血清)培养下,EGCG处理前后,HeLa细胞的分生与对照组相比其100μM下的HeLa细胞分生曲线呈略微下降趋势,其他浓度并未呈现明显效果。在细胞周期方面,高浓度EGCG(50μM和100μM)处理组的HeLa细胞被一定程度阻滞于S期和G2/M。100μM的EGCG处理对S6K1蛋白水平的表达抑制具有显著作用,而EGCG处理对HeLa细胞4E-BP1蛋白水平表达并没有显著作用。 因此,EGCG处理对HeLa细胞分生抑制具有一定作用,尤其是在低营养状态下,其对HeLa细胞的分生抑制作用随着浓度增加而增加。同时,低营养培养下,EGCG对mTOR底物4E-BP1蛋白的磷酸化水平随着处理浓度的增加而显著减少,有理由推断：4E-BP1可能是EGCG通过mTOR途径抑制HeLa细胞分生的靶点。同时,我们认为,用EGCG保健的同时,如果能控制营养能量水平,其保健效果可能会更好,更加深入、全面的研究值得继续进行。
【关键词】：EGCG HeLa细胞分生抑制 mTOR途径 S6K1 4E-BP1
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 致谢6-8
• 摘要8-10
• ABSTRACT10-12
• 图表索引12-13
• 缩写、符号与术语表13-14
• 目次14-16
• 第一章 文献综述16-32
• 1 mTOR研究进展16-27
• 1.1 mTOR的结构17-19
• 1.2 mTOR经典信号途径19-25
• 1.2.1 mTORC1的位置和信号通路20-25
• 1.2.2 mTORC2的位置和信号通路25
• 1.3 mTOR功能25-27
• 1.3.1 mTOR延缓衰老作用25-26
• 1.3.2 mTOR调节转录、细胞生长和增值26-27
• 2 EGCG在抗癌领域的研究27-30
• 3 研究目的和内容30-31
• 4 创新意义31-32
• 第二章 材料与方法32-40
• 1 材料32-34
• 1.1 细胞系32
• 1.2 试剂与配制32-33
• 1.3 主要仪器设备33-34
• 2 方法34-40
• 2.1 细胞培养34
• 2.2 药物处理34
• 2.3 形态学观察34
• 2.4 CellTiter-Blue细胞活性检测34-35
• 2.5 EGCG对HeLa细胞分生的影响35
• 2.6 流式细胞仪细胞周期检测35-36
• 2.7 细胞总蛋白提取36-37
• 2.8 蛋白定量37
• 2.9 Western-blotting检测蛋白表达37-39
• 2.10 统计学处理39-40
• 第三章 实验结果与分析40-48
• 3.1 EGCG对HeLa细胞形态影响40-41
• 3.2 EGCG对HeLa细胞分生曲线的影响41-45
• 3.3 EGCG对HeLa细胞周期的影响45
• 3.4 EGCG对mTOR底物S6K1和4E-BP1蛋白表达的影响45-48
• 第四章 总结与讨论48-51
• 参考文献51-58

【共引文献】

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本文编号：394680