DJ-1对卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

发布时间：2017-05-29 21:00

  本文关键词：DJ-1对卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡和侵袭的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:本研究利用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)抑制卵巢癌SKOV3细胞DJ-1的表达,探讨DJ-1对卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡和侵袭等生物学特性的影响。方法:1.设计并合成3对针对DJ-1的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),采用阳离子脂质体法瞬间转染SKOV3细胞。实验分组:①正常对照组;②阴性对照组;③siRNA-DJ-1-a组;④siRNA-DJ-1-b组;⑤siRNA-DJ-1-c组。2.通过蛋白印迹法(Western Blot)检测各组细胞中DJ-1蛋白的表达,筛选出干扰效果最佳的序列。3.分别采用MTT比色法、流式细胞术和Transwell侵袭实验检测DJ-1对SKOV3细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。结果:1.Western blot检测siRNA对DJ-1蛋白表达的影响,结果显示:转染后48h,正常对照组与阴性对照组相比,DJ-1蛋白表达差异无统计学意义(0.51±0.02 vs0.50±0.02,P0.05)。而siRNA-DJ-1-a组、siRNA-DJ-1-b组、siRNA-DJ-1-c组均显著低于其它对照组,差异有统计学意义(0.07±0.01、0.11±0.02、0.10±0.01 vs0.51±0.02、0.50±0.02,P0.05),其中siRNA-DJ-1-a组较其它两组抑制效果更明显,差异有统计学意义(0.07±0.01 vs 0.11±0.02,0.07±0.01 vs 0.10±0.01,P0.05)。2.MTT比色法检测si RNA-DJ-1-a对SKOV3细胞增殖的影响,结果显示:si RNA-DJ-1转染后12h,正常对照组、阴性对照组、siRNA-DJ-1-a组细胞增殖率差异无统计学意义(P0.05),而siRNA-DJ-1转染后24h、48h和72h,si RNA-DJ-1-a组细胞增殖率明显低于正常对照组(24h,0.379±0.044 vs0.492±0.035;48h,0.486±0.059 vs 1.127±0.078;72h,0.738±0.046 vs 1.373±0.055)和阴性对照组(24h,0.379±0.044 vs 0.460±0.057;48h,0.486±0.059 vs 1.043±0.080;72h,0.738±0.046 vs 1.350±0.067),差异有统计学意义(P0.05)。3.流式细胞术检测siRNA-DJ-1-a对SKOV3细胞凋亡的影响,结果显示:si RNA-DJ-1转染后24h,正常对照组与阴性对照组的早期凋亡率相比,差异无统计学意义(1.77±0.71%vs 2.83±0.55%,P0.05),而siRNA-DJ-1-a组的早期凋亡率明显高于正常对照组(27.97±9.86%vs 1.77±0.71%)和阴性对照组(27.97±9.86%vs 2.83±0.55%),差异有统计学意义(P0.05)。4.Transwell侵袭实验检测siRNA-DJ-1-a对SKOV3细胞侵袭的影响,结果显示:siRNA-DJ-1转染后48h,正常对照组与阴性对照组穿膜细胞数相比,差异无统计学意义(60.83±2.04 vs 58.83±1.47,P0.05),siRNA-DJ-1-a组的穿膜细胞数明显少于正常对照组(27.67±1.86 vs 60.83±2.04)和阴性对照组(27.67±1.86vs 58.83±1.47),差异有统计学意义(P0.05)。结论:si RNA下调DJ-1基因表达可抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡。
【关键词】：卵巢癌 DJ-1 增殖 凋亡 侵袭
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文缩略词表9-10
• 第1章 引言10-13
• 第2章 实验材料13-17
• 2.1 实验细胞13
• 2.2 主要试剂13
• 2.3 主要仪器设备13-14
• 2.4 主要试剂配制14-17
• 第3章 实验方法17-25
• 3.1 卵巢癌SKOV3细胞培养17-18
• 3.1.1 细胞传代17
• 3.1.2 细胞冻存17-18
• 3.1.3 细胞复苏18
• 3.2 si RNA-DJ-1 的设计与合成18-19
• 3.3 实验分组19
• 3.4 细胞转染19-20
• 3.5 Western blot检测转染siRNA后对DJ-1 蛋白表达的影响20-22
• 3.5.1 细胞总蛋白提取20
• 3.5.2 SDS-PAGE电泳20-21
• 3.5.3 转膜21
• 3.5.4 封闭21-22
• 3.5.5 免疫反应22
• 3.5.6 化学发光、曝光22
• 3.5.7 凝胶图像分析22
• 3.6 MTT检测DJ-1 对SKOV3细胞增殖的影响22-23
• 3.7 流式细胞术检测DJ-1 对SKOV3细胞凋亡的影响23
• 3.8 Transwell实验检测DJ-1 对SKOV3细胞侵袭能力的影响23-24
• 3.9 统计学分析24-25
• 第4章 实验结果25-30
• 4.1 FAM荧光检测siRNA对SKOV3细胞的转染效率25
• 4.2 Western blot检测siRNA对DJ-1 蛋白表达的影响25-26
• 4.3 MTT检测siRNA-DJ-1 对SKOV3细胞生长的影响26-27
• 4.4 流式细胞术检测si RNA-DJ-1 对SKOV3细胞凋亡的影响27-28
• 4.5 Transwel检测siRNA-DJ-1 对SKOV3细胞侵袭能力的影响28-30
• 第5章 讨论30-34
• 第6章 结论与展望34-35
• 6.1 结论34
• 6.2 展望34-35
• 致谢35-36
• 参考文献36-39
• 攻读学位期间的研究成果39-40
• 综述40-45
• 参考文献44-45

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