微小RNA let-7在重度子痫前期母体外周血中的表达及意义

发布时间：2017-07-06 14:22

  本文关键词：微小RNA let-7在重度子痫前期母体外周血中的表达及意义

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【摘要】：目的:妊娠期高血压疾病(Hypertensive disorder complicating pregnancy,HDCP)是导致孕产妇和围生儿病率及死亡率的主要原因。子痫前期(preeclampsia,PE)属于HDCP的范畴,如未早期诊断和(或)及时治疗,将严重威胁母婴健康,但是目前,其发病机制至今不明。因此,研究PE的发生机制对提高PE诊断和治疗有非常重要的临床意义。微小RNA(micro RNA,mi RNA)是一类内源性非编码小RNA,let-7家族是mi RNAs的一类,在转录水平调控基因的表达。let-7家族与PE相关性的研究相对少见。在本次研究中,通过检测重度子痫前期(severe preeclampsia,SPE)及正常妊娠(normal pregnancy,NP)妇女外周血白细胞中微小RNA let-7家族成员中let-7a、let-7b、let-7g、let-7i的表达变化,初步探索let-7与PE的相关性,为进一步研究PE的发病机制提供理论基础。方法:收集吉林大学第二医院2015年10月至2016年2月产科住院SPE和NP妇女新鲜外周血标本。查阅其相关临床资料并记录。PE的诊断标准参照全国统一教材《妇产科学》第8版。本实验选取的各组患者均排除心血管疾病、肝肾疾病、糖尿病及急慢性感染性疾病等妊娠合并症病史。采用mi Rcute mi RNA提取分离试剂盒提取外周血总RNA后,用紫外分光光度仪测定法检测总RNA的浓度、OD值和纯度。总RNA进行逆转录,选用U6作为内参基因,利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术对micro RNA let-7家族中的let-7a、let-7b、let-7g、let-7i进行扩增。采用SPSS 21.0统计软件和2-ΔΔCT相对定量法处理数据。结果:1、let-7a、let-7b、let-7g、let-7i在NP对照组、SPE妇女外周血白细胞中均有表达。2、经Pearson和Spearman’s相关分析发现,let-7a、let-7b、let-7g、let-7i在外周血白细胞的表达水平与年龄、体质指数不相关(P0.05)。3、let-7a、let-7g在SPE组和NP组外周血白细胞中的表达水平差异有统计学意义(P0.05)。4、let-7b、let-7i在SPE组和NP组外周血白细胞中的表达水平差异无统计学意义(P0.05)。结论:1、应用SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR结合比较Ct值法得到了目的基因let-7a、let-7b、let-7g、let-7i相对于内参基因U6的表达定量,该方法可行,简单且特异性较好。2、外周血白细胞中let-7a、let-7b、let-7g、let-7i在NP对照组和SPE妇女均有表达。3、外周血白细胞中let-7a、let-7b、let-7g、let-7i表达水平可能与年龄、体质指数(BMI)无关。4、外周血白细胞中let-7a、let-7g表达水平与SPE存在相关性,具体机制有待深入研究。5、外周血白细胞中let-7b、let-7i表达水平与SPE不相关。
【关键词】：子痫前期 微小RNA let-7 qRT-PCR
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R714.244
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 英文缩略词表11-12
• 第1章 引言12-19
• 1.1 研究背景12-13
• 1.2 文献综述13-19
• 第2章 实验材料与方法19-25
• 2.1 一般资料19-20
• 2.1.1 研究对象19
• 2.1.2 纳入标准19
• 2.1.3 排除标准19
• 2.1.4 主要仪器和设备19-20
• 2.1.5 主要试剂及耗材20
• 2.2 实验方法20-25
• 2.2.1 标本采集20
• 2.2.2 外周血白细胞中总RNA提取20-22
• 2.2.3 总RNA的纯度检测22
• 2.2.4 反转录合成cDNA22-23
• 2.2.5 实时荧光定量PCR23-24
• 2.2.6 数据处理24-25
• 第3章 实验结果25-34
• 3.1 病例组与正常对照组临床资料比较25
• 3.2 产物特异性25-26
• 3.3 内参U6、let-7a、let-7b、let-7g及let-7i的实时荧光定量PCR的扩增曲线26-27
• 3.4 Let-7 的表达分析27-30
• 3.5 Let-7a在SPE患者外周血中的表达情况30
• 3.6 Let-7b在SPE患者外周血中的表达情况30-31
• 3.7 Let-7g在SPE患者外周血中的表达情况31-32
• 3.8 Let-7i在SPE患者外周血中的表达情况32-34
• 第4章 讨论34-37
• 第5章 结论37-38
• 参考文献38-45
• 作者简介及攻读硕士期间所取得的科研成果45-46
• 致谢46

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本文编号：526568