产前应激引起的子鼠海马5-HT1A和BDNF乙酰化修饰在抑郁样行为中的作用

发布时间：2017-08-24 04:22

  本文关键词：产前应激引起的子鼠海马5-HT1A和BDNF乙酰化修饰在抑郁样行为中的作用

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【摘要】：研究目的：抑郁病的发病机制与遗传、神经递质紊乱、激素异常和不良社会心理因素等一系列因素相关,由这些因素导致的5-HT缺乏是普遍认可的抑郁症发病机制之一。由于5-HT1A受体被看作应激调节过程的一个重要媒介,在应激引起的抗精神紊乱过程中起保护作用。与此同时,5-HT的摄取过程由5-HTT控制,而且5-HT与BDNF在病理生理学的情绪障碍中有交互作用,所以研究5.HT1A.5-HTT和BDNF对了解抑郁症发病机制有重要意义。之前的研究发现组蛋白乙酰化修饰与应激诱导的精神病学障碍包括抑郁病相关。然而,这些研究主要集中在组蛋白乙酰化对抑郁的成年人应激反应的调节,很少有人研究产前应激对子代组蛋白修饰的影响。为了探究产前应激是否通过改变海马HDAC4表达和5-HT1A、5-HTT和BDNF启动子区域乙酰化水平调控这些基因的转录,从而导致了产前应激子代抑郁样行为,我们建立了产前应激模型,检测了子代大鼠海马5-HTlA、5-HTT和BDNF启动子区域乙酰化水平及其基因的表达。研究方法：产后子代雄鼠共分4组(每组10只)：①对照组(Control goup,C),②产前应激组(prenatal stress,PS),③应激给药组(prenatal stress+NaB,PS+NaB),④应激对照组(prenatal stress+saline,PS+NS)。PS+NaB组和PS+NS组子鼠于生后第23天连续七天分别给予NaB和生理盐水,其他组子鼠正常喂养。所有子鼠于生后第30天进行行为学实验,随后取海马,CHIP检验5-HT1A.5.HTT和BDNF基因启动子区域乙酰化水平,采用荧光定量RCR法检测HDAC4.5-HT1A.5.HTT和BDNF各基因mRNA的表达。研究结果：1.糖水偏好实验结果表明PS子鼠糖水偏好百分比明显低于对照组；高价十字迷宫实验中,PS子鼠进入开放臂的次数百分比和在开放臂的滞留时间百分比与对照组相比显著降低；PS子鼠在强迫游泳实验中表现出更长的不动时间。2.腹腔注射NaB后,PS子鼠的抑郁样行为得到了缓解。3. CHIP结果表明PS子鼠海马5-HT1A和BDNF基因启动子区域乙酰化水平较对照组低,而5-HTT启动子区域乙酰化水平较对照组高；4. RT-PCR显示PS子鼠5-HT1A和BDNF基因mRNA的水平也显著低于对照组,而5-HTT与对照组无明显差异。5.NaB能部分逆转由PS引起的子鼠海马5-HT1A和BDNF基因转录前乙酰化修饰和转录水平的改变。结论：1.PS引起子代雄鼠的抑郁样行为。2.PS引起子鼠海马内HDAC4的过表达,进而下调5-HTlA和BDNF基因启动子区域组蛋白乙酰化水平。3.5-HT1A和BDNF:基因启动子区域组蛋白乙酰化水平的下调抑制了其基因mRNA的表达。4.NaB通过抑制HDAC4的表达,部分逆转了5-HT1A和BDNF基因启动子区域组蛋白乙酰化水平和其mRNA的表达,从而改善了子鼠抑郁样行为。
【关键词】：产前应激 抑郁 乙酰化 5-HT1A受体 BDNF
【学位授予单位】：西北大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R714.2
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-12
• 第一章 前言12-26
• 1.1 应激12-14
• 1.1.1 应激的概述12-13
• 1.1.2 应激的分类和特点13-14
• 1.2 产前应激14-16
• 1.2.1 产前应激14
• 1.2.2 产前应激与子代海马发育14-15
• 1.2.3 产前应激与子代抑郁样行为15-16
• 1.3 产前应激与5-HT系统16-21
• 1.3.1 5-HT的功能16-17
• 1.3.2 5-HT1A受体和5-HTT的作用17-19
• 1.3.3 5-HT系统与HPA轴的交互作用19-20
• 1.3.4 BDNF与抑郁20
• 1.3.5 BDNF与5-HT系统的交互作用20-21
• 1.4 乙酰化水平改变能引起抑郁21-26
• 1.4.1 乙酰化机制21-23
• 1.4.1.1 乙酰化的概念21-22
• 1.4.1.2 HDAC4对乙酰化的调控22-23
• 1.4.2 应激引起乙酰化水平的改变和疾病23-24
• 1.4.3 产前应激、乙酰化与5-HT系统24-26
• 第二章 PS引起子代大鼠抑郁样行为26-32
• 2.1 实验仪器及材料26
• 2.2 实验方法26-28
• 2.2.1 动物分组26-27
• 2.2.2 PS模型的建立27
• 2.2.3 糖水偏好实验27
• 2.2.4 高架十字迷宫27-28
• 2.2.5 强迫游泳实验28
• 2.3 统计学分析28
• 2.4 结果28-32
• 2.4.1 PS引起一月龄子代雄鼠在糖水偏好实验中的抑郁样行为28-29
• 2.4.2 PS引起子鼠在高架十字迷宫实验中的焦虑样行为29-30
• 2.4.3 PS引起子鼠强迫游泳实验中抑郁样行为30-32
• 第三章 PS对子代雄鼠海马HDAC4基因表达的影响32-38
• 3.1 实验材料32-34
• 3.1.1 主要仪器和试剂32-33
• 3.1.2 引物序列33
• 3.1.3 溶液配制33-34
• 3.2 实验原理和实验方法34-37
• 3.2.1 实验原理34
• 3.2.2 组织提取34
• 3.2.3 海马总RNA的提取34-35
• 3.2.4 反转录35-36
• 3.2.5 实时定量PCR(RT-PCR)36
• 3.2.6 目的基因和管家基因(内参)相对表达量的计算36-37
• 3.3 统计学分析37
• 3.4 实验结果37-38
• 第四章 产前应激对子鼠海马5-HT1A、5-HTT和BDNF基因启动子区域乙酰化水平的影响38-51
• 4.1 实验材料38-40
• 4.1.1 主要仪器和试剂38-39
• 4.1.2 各基因启动子区域引物序列39-40
• 4.1.3 试剂配制40
• 4.2 实验原理和方法40-45
• 4.2.1 染色质免疫共沉淀(CHIP)原理40-41
• 4.2.2 实验方法41-45
• 4.2.2.1 组织提取41
• 4.2.2.2 优化超声条件41-42
• 4.2.2.3 免疫沉淀反应42-43
• 4.2.2.4 RTPCR43-45
• 4.2.3 注意事项45
• 4.2.4 实验组与对照组目的片段相对表达量的计算45
• 4.3 统计学分析45
• 4.4 实验结果45-51
• 4.4.1 PS对子鼠海马5-HT1A受体启动子区组蛋白乙酰化修饰的影响46-47
• 4.4.2 PS对子鼠海马5-HTT启动子区组蛋白乙酰化修饰的影响47-49
• 4.4.3 PS对子鼠海马BDNF启动子区组蛋白乙酰化修饰的影响49-51
• 第五章 PS对子代雄鼠海马5-HT1A受体、5-HTT和BDNF基因表达的影响51-55
• 5.1 实验材料51
• 5.1.1 主要仪器和试剂51
• 5.1.2 引物序列51
• 5.1.3 溶液配制51
• 5.2 实验方法51-52
• 5.2.1 组织提取51
• 5.2.2 海马总RNA的提取51
• 5.2.3 反转录51-52
• 5.2.4 RT-PCR52
• 5.3 统计学分析52
• 5.4 实验结果52-55
• 5.4.1 PS引起子代大鼠海马5-HT1A受体表达的变化52-53
• 5.4.2 PS对子代大鼠海马5-HTT表达的影响53
• 5.4.3 PS对子代大鼠海马BDNF基因表达的影响53-55
• 第六章 讨论55-58
• 结论58-59
• 参考文献59-69
• 攻读硕士期间获得的成果69-70
• 致谢70

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