CD147通过非依赖p53途径促进卵巢癌细胞糖代谢重编程的机制研究

发布时间：2017-08-27 02:19

  本文关键词：CD147通过非依赖p53途径促进卵巢癌细胞糖代谢重编程的机制研究

  更多相关文章： 卵巢癌 糖酵解 肿瘤代谢 CD147 FOXM1

【摘要】：能量代谢异常是肿瘤细胞的基本特征,在肿瘤发生与演进中发挥了关键作用。糖代谢重编程是肿瘤细胞能量代谢失调的主要方面,在生物合成与氧化还原反应中提供能量和物质前体,但肿瘤细胞这种低效供能方式的分子机制尚不明确。既往研究表明,CD147通过p53途径促进人肝癌细胞糖酵解与增殖。p53失活是人类恶性肿瘤细胞中的普遍现象,约60%的卵巢癌患者存在p53突变。然而,CD147能否通过非依赖p53途径促进卵巢癌细胞糖代谢重编程及其具体的分子机制尚不明确。本课题在既往研究基础上,借助p53缺失型卵巢癌细胞系,深入研究CD147参与卵巢癌细胞糖代谢重编程的生物学作用,系统分析CD147通过非依赖p53途径促进卵巢癌细胞有氧糖酵解的分子网络调控机制。这些研究可进一步加深对卵巢癌能量代谢异常的理解,也为CD147作为卵巢癌治疗靶点提供更为丰富的分子理论基础。本研究主要分为以下三个部分第一部分:CD147通过非依赖p53途径促进卵巢癌细胞糖酵解的作用研究为阐明CD147在卵巢癌细胞糖代谢过程中的作用,我们构建了稳定干涉CD147的卵巢癌细胞系。我们发现无论是在p53野生型的A2780细胞中,还是在p53缺失型的SKOV3细胞中,干涉CD147的表达均会降低细胞糖摄取、糖酵解速率和乳酸排出,而氧消耗则有所升高。小动物PET/CT成像系统显示干涉CD147的表达会显著降低裸鼠移植瘤的18F-FDG摄取能力,且移植瘤的细胞增殖速度有所降低。总之,我们的实验结果表明CD147具有促进卵巢癌细胞糖酵解的作用,并有可能成为基于能量代谢失调的靶点,从而制定新的抗肿瘤策略。第二部分:CD147在卵巢癌细胞中调控FOXM1的机制研究为明确CD147促进卵巢癌细胞糖酵解的分子机制,我们使用shRNA技术在卵巢癌细胞A2780和SKOV3中干涉了CD147的表达。Western blot结果显示,在卵巢癌细胞A2780和SKOV3中下调CD147会明显降低CD147,pAKT、pSTAT3和FOXM1的表达。Real time PCR结果显示,在卵巢癌细胞A2780和SKOV3中下调CD147会明显降低FOXM1 mRNA的表达水平。另一方面,AKT抑制剂LY294002和STAT3抑制剂S3I-201在卵巢癌细胞中会显著降低过表达CD147对FOXM1的上调作用。激光共聚焦成像结果显示,CD147和CD44在卵巢癌细胞中共定位。通过免疫组织化学染色检测,我们发现CD147、pAKT、pSTAT3和FOXM1在卵巢癌组织中共表达。第三部分:转录因子FOXM1促进卵巢癌细胞糖代谢重编程的机制研究我们首先筛选了转录因子FOXM1可能调控的糖酵解关键酶,在卵巢癌细胞中干涉FOXM1的表达后,发现GLUT1和HK2的表达水平也随之下降,且细胞糖酵解和增殖明显受到抑制。进一步研究发现,GLUT1和HK2的DNA启动子序列存在转录因子FOXM1的结合位点,FOXM1能在卵巢癌细胞中激活GLUT1和HK2的转录与表达。我们还发现FOXM1、GLUT1和HK2在卵巢癌组织中的表达水平远高于正常卵巢组织,且FOXM1在卵巢癌组织中的表达分别与GLUT1和HK2的表达正相关。
【关键词】：卵巢癌 糖酵解 肿瘤代谢 CD147 FOXM1
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 缩略语表6-8
• 中文摘要8-10
• Abstract10-13
• 前言13-15
• 文献回顾15-24
• 第一部分 CD147通过非依赖p53途径促进卵巢癌细胞有氧糖酵解的作用研究24-43
• 1 材料24-27
• 1.1 主要仪器设备24-25
• 1.2 主要试剂和耗材25
• 1.3 细胞系25-26
• 1.4 实验动物26
• 1.5 主要缓冲液26-27
• 2 方法27-37
• 2.1 细胞培养27
• 2.2 构建稳定干涉CD147的卵巢癌细胞系A2780和SKOV327-28
• 2.3 Real Time PCR28-30
• 2.4 蛋白免疫印迹30-32
• 2.5 荷瘤小鼠模型的构建32
• 2.6 细胞葡萄糖摄取检测32
• 2.7 细胞糖酵解速率检测32-33
• 2.8 细胞乳酸排出检测33-34
• 2.9 细胞氧消耗速率检测34
• 2.10 荷瘤小鼠~(18)F-FDG摄取率检测34
• 2.11 免疫组织化学染色及评分34-37
• 2.12 统计学分析37
• 3 结果37-41
• 3.1 下调CD147能显著抑制卵巢癌细胞糖酵解37-39
• 3.2 下调CD147能抑制裸鼠移植瘤的增殖39-41
• 4 讨论41-43
• 第二部分 CD147在卵巢癌细胞中调控FOXM1的机制研究43-57
• 1 材料43-46
• 1.1 细胞系43
• 1.2 仪器设备43-44
• 1.3 试剂和耗材44-45
• 1.4 缓冲液45-46
• 2 方法46-49
• 2.1 Real Time PCR46
• 2.2 蛋白免疫印迹46-47
• 2.3 免疫荧光染色47-48
• 2.4 免疫组织化学染色及评分48-49
• 2.5 统计学分析49
• 3 结果49-54
• 3.1 CD147能通过非依赖p53途径调控FOXM1、HK2和GLUT1的表达49-51
• 3.2 CD147和CD44在卵巢癌细胞中发生共定位51-52
• 3.3 CD147、pAKT、p STAT3和FOXM1在卵巢癌组织中表达正相关52-54
• 4 讨论54-57
• 第三部分 转录因子FOXM1促进卵巢癌细胞糖代谢重编程的机制研究57-79
• 1 材料57-60
• 1.1 细胞系57
• 1.2 仪器设备57-58
• 1.3 试剂和耗材58-59
• 1.4 缓冲液59-60
• 2 方法60-69
• 2.1 构建稳定干涉FOXM1的卵巢癌细胞系60
• 2.2 Real Time PCR60-61
• 2.3 蛋白免疫印迹61-62
• 2.4 荷瘤小鼠模型的构建62
• 2.5 细胞葡萄糖摄取检测62-63
• 2.6 细胞糖酵解速率检测63
• 2.7 细胞乳酸排出检测63-64
• 2.8 细胞氧消耗检测64
• 2.9 荷瘤小鼠~(18)F-FDG摄取率检测64-65
• 2.10 染色质免疫沉淀Ch IP65-67
• 2.11 双荧光素酶报告基因检测67-68
• 2.12 免疫组织化学染色及评分68
• 2.13 统计学分析68-69
• 3 结果69-77
• 3.1 下调FOXM1能显著抑制卵巢癌细胞糖酵解69-70
• 3.2 GLUT1和HK2是FOXM1直接调控的糖酵解关键酶70-74
• 3.3 下调FOXM1能抑制裸鼠移植瘤的增殖74-75
• 3.4 FOXM1在卵巢癌组织中的表达分别与GLUT1和HK2的表达正相关75-77
• 4 讨论77-79
• 小结79-80
• 参考文献80-87
• 个人简历及研究成果87-88
• 致谢88-89

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