TLR4高表达对HPV感染阳性宫颈癌细胞功能的影响研究

发布时间：2017-08-31 21:17

  本文关键词：TLR4高表达对HPV感染阳性宫颈癌细胞功能的影响研究

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【摘要】：宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一,HPV持续感染是其主要致病因素。包括TLR4在内的人类天然免疫受体家族TLRs在机体感染防御中发挥重要作用,而且与炎症性肿瘤的发生有着密切联系,它可通过介导慢性炎症反应调控肿瘤微环境,直接或间接地影响肿瘤的发生和发展。因此,与炎症和免疫极度相关的TLR4及其信号通路无疑成为宫颈癌这类炎症性肿瘤发生机制研究的良好靶点和途径。但目前,有关TLR4对宫颈癌发生、发展的作用及作用机制的研究报道还较少。本研究从比较HPV高危亚型——HPV-16感染(HPV-16阳性)的宫颈癌SiHa细胞和无HPV感染(HPV阴性)的宫颈癌C33A细胞中的TLR4差异性表达检测(实时荧光定量PCR)入手,进一步用流式细胞术、Annex V-FITC/PI凋亡检测试剂盒、MTS、Wound healing、Transwell等方法进行TLR4高表达(LPS刺激)对宫颈癌细胞的细胞周期、凋亡抵抗、生长繁殖、侵袭转移等方面的作用影响研究,以期揭示TLR4介入HPV感染对宫颈癌的实际作用。结果发现：1.TLR4在HPV感染的宫颈癌细胞SiHa中高表达,即HPV感染可促进宫颈癌细胞的TLR4表达。2.TLR4协同HPV感染可促进肿瘤细胞繁殖。3.TLR4协同HPV感染可促进肿瘤细胞的抗凋亡。4.TLR4协同HPV感染可促进肿瘤细胞的迁移侵袭能力。5.TLR4的高表达在一定程度上阻滞HPV感染阳性宫颈癌细胞的细胞周期进入,可能以此适当进行细胞繁殖的调节。综上,我们的研究结果综合显示：TLR4在HPV感染的宫颈癌细胞株上具有更为活跃的表达；而TLR4的高表达总体对HPV感染导致的宫颈癌的发生发展起到促进作用。这在一定程度上提示：TLR4通路的激活可能是HPV感染导致宫颈癌发生和发展的机制之一,靶向TLRs的宫颈癌临床应用基础研究值得进一步开展。
【关键词】：Toll样受体4 宫颈癌 人乳头状瘤病毒 SiHa(HPV-16阳性)细胞 C33A(HPV阴性)细胞
【学位授予单位】：云南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-9
• 缩略词对照表9-11
• 第一章 前言11-17
• 1 宫颈癌的概述11-14
• 1.1 宫颈癌流行病学11
• 1.2 宫颈癌的症状11-12
• 1.3 宫颈癌的预防12
• 1.4 人乳头状瘤病毒12-13
• 1.5 高危型HPV16引发宫颈癌的机制13-14
• 2 TLR4与宫颈癌的关系14-16
• 2.1 TLR4分子概述14-15
• 2.2 TLR4与炎症肿瘤——宫颈癌的关系15-16
• 3 本研究的目的和意义16-17
• 第二章 材料和方法17-27
• 1 主要仪器设备17-18
• 2 主要实验试剂18-19
• 3 实验材料19
• 4 实验内容和方法19-26
• 4.1 细胞培养19-21
• 4.1.1 细胞复苏19
• 4.1.2 换液19-20
• 4.1.3 细胞传代20
• 4.1.4 细胞冻存20-21
• 4.2 TLR4表达的差异检测——qRT-PCR21-23
• 4.2.1 总RNA的提取21-22
• 4.2.2 TLR4引物设计22
• 4.2.3 qRT-PCR22-23
• 4.3 TLR4的表达对C33A细胞和SiHa细胞周期的影响——流式细胞术检测23-24
• 4.4 细胞增殖比MTS法检测24
• 4.5 TLR4的表达对C33A细胞和SiHa细胞迁移和侵袭能力的影响比较24-26
• 4.5.1 细胞迁移检测——Wound-Healing24-25
• 4.5.2 细胞侵袭检测——Transwell25-26
• 5 数据分析26-27
• 第三章 实验结果与分析27-39
• 1 qRT-PCR法进行的TLR4表达比较检测27-29
• 1.1 无LPS刺激时C33A细胞与SiHa细胞TLR4表达的比较27
• 1.2 不同浓度LPS刺激下C33A细胞与SiHa细胞TLR4表达的比较27-28
• 1.3 25ug/ml LPS刺激下C33A细胞和SiHa细胞不同时间段TLR4的表达比较28-29
• 2 MTS细胞增殖实验29
• 3 C33A细胞和SiHa细胞的周期检测29-33
• 3.1 无LPS处理C33A细胞和SiHa细胞细胞周期比较29-31
• 3.2 LPS处理C33A细胞和SiHa细胞对细胞周期的影响31-33
• 4 C33A细胞和SiHa细胞的凋亡检测33-35
• 4.1 无LPS刺激下C33A细胞和SiHa细胞凋亡检测33-34
• 4.2 LPS处理C33A细胞和SiHa细胞后,对细胞凋亡的影响34-35
• 5 细胞迁移检测35-37
• 5.1 无LPS处理C33A细胞和SiHa细胞的迁移能力比较35-36
• 5.2 LPS处理C33A细胞和SiHa细胞对细胞迁移能力的影响36-37
• 6 细胞侵袭检测37-39
• 第四章 讨论39-42
• 1 HPV感染可促进宫颈癌细胞TLR4的表达39-40
• 2 TLR4对SiHa及C33A细胞繁殖、细胞凋亡、细胞侵袭转移和细胞周期的影响比较40-42
• 2.1 TLR4与HPV感染联合促进肿瘤细胞繁殖40
• 2.2 TLR4与HPV感染联合促进肿瘤细胞的抗凋亡40-41
• 2.3 TLR4与HPV感染联合促进肿瘤细胞的迁移侵袭能力41
• 2.4 TLR4的高表达在一定程度上阻滞HPV感染细胞的细胞周期进入,可能以此进行细胞繁殖的调节41-42
• 参考文献42-45
• 致谢45

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本文编号：767967