高龄妇女卵细胞组蛋白乙酰化状态的研究

发布时间：2017-09-01 00:28

  本文关键词：高龄妇女卵细胞组蛋白乙酰化状态的研究

  更多相关文章： 组蛋白乙酰化 女性高龄 卵细胞 减数分裂 染色体排列异常

【摘要】：目的：随着社会的发展,高龄妇女寻求不孕治疗的人数逐渐增加,与年龄相关的母源性生殖力下降已成为全球生殖医学研究的重要课题。卵子质量下降是与女性高龄相关的生育力降低的原因之一,其主要表现为高发的卵子非整倍性。关于有丝分裂和减数分裂的研究表明,有缺陷的染色质重塑是引起卵细胞非整倍体发生的重要因素,但其中涉及的分子机制依然不明确。卵细胞生长发育过程中,组蛋白H3、H4乙酰化／去乙酰化的动态变化参与了染色质结构的改变和基因表达的调控,但减数分裂过程中染色体的正确分离是否与该过程有关,目前的研究还没有明确的定论。本研究采用细胞免疫荧光技术,通过分析人类卵细胞各发育阶段组蛋白H3K9和H4K12乙酰化状态的变化,以及与微管结构和染色体排列状态的关系,以期探究人类卵细胞减数发育过程中染色质重塑涉及的异常的表观遗传调控是否与女性高龄相关,并导致染色体的错误分离。方法：本研究共收集来自云南省第一人民医院生殖医学科行IVF常规和ICSI治疗的病例160例,其中共获得GV期卵细胞209个、MI期124个、MⅡ期111个。通过应用细胞免疫荧光技术、荧光显微技术和激光共聚焦技术分析卵细胞各发育时期组蛋白H3K9和H4K12乙酰化状态的变化,以及MII期卵细胞组蛋白乙酰化状态与微管结构和染色体排列状态的关系。结果：人类GV期卵细胞组蛋白H3K9和H4K12均表现出高水平的乙酰化状态。约50%的MI期卵细胞中组蛋白H3K9和H4K12乙酰化水平显著降低。48.4%的MII期卵细胞中组蛋白H4K12呈现较弱的乙酰化水平。几乎检测不到MII期卵细胞组蛋白H3K9的乙酰化信号。高龄组MII期卵细胞组蛋白H4K12的乙酰化水平明显高于低龄组(62.8% vs.37.9%,P=0.047)。女性年龄和MII期卵细胞组蛋白H4K12的乙酰化水平显著相关(r=0.975,P=0.013)。在染色体排列状态异常的MⅡ期卵细胞中,88%的卵细胞表现出组蛋白H4K12的乙酰化状态,呈现去乙酰化状态的仅占33%(P0.001)。室温暴露导致了MII期卵细胞组蛋白H4K12乙酰化水平增高。多精受精组MII期卵细胞组蛋白H4K12的乙酰化率显著高于非多精受精组(58.3% vs 30.0%,P=0.011)。结论：通过研究发现,随着女性年龄增加,MII期卵细胞组蛋白H4K12发生不完全去乙酰化的概率增大,并且与染色体的排列异常密切相关,提示有缺陷的卵细胞组蛋白去乙酰化是导致与年龄相关的卵细胞非整倍体发生的一个重要影响因素。此外,室温暴露会引起MII期卵细胞组蛋白H4K12的乙酰化率升高。推测MII期卵细胞组蛋白H4K12的不完全去乙酰化是导致多精受精的一个影响因素。
【关键词】：组蛋白乙酰化 女性高龄 卵细胞 减数分裂 染色体排列异常
【学位授予单位】：昆明理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R711.6
【目录】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 缩略词说明10-14
• 第一章 绪论14-22
• 1.1 引言14
• 1.2 女性年龄与不孕14-15
• 1.3 卵子质量下降导致的生育力降低15-16
• 1.4 组蛋白乙酰化在卵子发育过程中的重要作用16-18
• 1.5 哺乳动物卵细胞发育过程中组蛋白乙酰化状态的变化18-21
• 1.6 展望21-22
• 第二章 卵细胞各发育阶段组蛋白H3K9和H4K12乙酰化水平22-38
• 2.1 材料与方法22-27
• 2.1.1 实验试剂与仪器22-23
• 2.1.2 研究对象的选择和样本的收集23-24
• 2.1.3 样本的处理24
• 2.1.4 透明带处理24-25
• 2.1.5 固定与渗透25
• 2.1.6 细胞免疫荧光染色25-27
• 2.1.7 荧光显微技术检测卵细胞各发育时期组蛋白H4K12和H3K9乙酰化水平的变化27
• 2.1.8 统计学分析27
• 2.2 结果27-34
• 2.2.1 比较各年龄组间hCG日激素水平差异27-28
• 2.2.2 比较各年龄组不同发育阶段卵细胞组蛋白H3K9、H4K12的乙酰化率及变化规律28-34
• 2.3 讨论34-36
• 2.4 小结36-38
• 第三章 高龄妇女MII期卵细胞组蛋白H4K12乙酰化水平与微管、染色体状态的检测38-50
• 3.1 材料与方法38-43
• 3.1.1 实验试剂与仪器38-39
• 3.1.2 研究对象的选择和样本收集39-40
• 3.1.3 样本的处理40
• 3.1.4 固定与渗透40-41
• 3.1.5 细胞免疫荧光染色41-42
• 3.1.6 MII期卵细胞组蛋白H4K12乙酰化水平与微管和染色体排列状态的检测42-43
• 3.1.7 统计学分析43
• 3.2 结果43-47
• 3.3 讨论47-49
• 3.4 小结49-50
• 第四章 温度对MII期卵细胞组蛋白H3K9、H4K12乙酰化状态的影响50-58
• 4.1 材料与方法51-54
• 4.1.1 实验试剂与仪器51-52
• 4.1.2 研究对象的选择和样本收集52-53
• 4.1.3 室温孵育与复温53
• 4.1.4 固定与渗透53
• 4.1.5 细胞免疫荧光染色53-54
• 4.1.6 室温下MII期卵细胞组蛋白H3K9和H4K12乙酰化水平的检测54
• 4.1.7 统计学分析54
• 4.2 结果54-55
• 4.3 讨论55-57
• 4.3.1 温度对MⅡ期卵细胞组蛋白H4K12乙酰化状态的影响55-56
• 4.3.2 温度对MⅡ期卵细胞组蛋白H3K9乙酰化状态的影响56-57
• 4.4 小结57-58
• 第五章 卵细胞组蛋白H3K9、H4K12乙酰化状态变化对IVF临床结局的影响58-68
• 5.1 材料与方法58-59
• 5.1.1 研究资料58
• 5.1.2 实验室指标58
• 5.1.3 实验方法58-59
• 5.1.4 统计学分析59
• 5.2 结果59-60
• 5.3 讨论60-62
• 5.4 小结62-63
• 附表63-65
• 附图65-68
• 第六章、总结与展望68-72
• 6.1 总结68-69
• 6.2 展望69-72
• 致谢72-74
• 参考文献74-84
• 附录A：攻读硕士期间发表论文情况84-86
• 附录B：受试者基本信息86-89

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