整体动物水平初步探讨DNMT3A在人子宫腺肌病发病过程中的作用

发布时间：2017-09-15 13:04

  本文关键词：整体动物水平初步探讨DNMT3A在人子宫腺肌病发病过程中的作用

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【摘要】：目的:我们的前期研究发现来自临床确诊的子宫腺肌病(adenomyosis,AM)患者异位子宫内膜组织及从组织中分离、鉴定的间质细胞(ESCs)DNMT3A的mRNA与蛋白表达均显著下调;经转染DNMT3A重组慢病毒表达载体所构建的DNMT3A过表达的ESCs+DNMT3A转基因细胞的细胞增殖率及迁移率减慢,细胞凋亡增加。然而,是否在体内也存在相似结果仍然未知,因此,我们进一步从整体动物水平探讨DNMT3A在子宫腺肌病发病过程中的作用。方法:收集临床确诊的AM患者异位子宫内膜组织10例及正常对照内膜组织7例,分别分离培养ESCs,蛋白质印记法检测DNMT3A在上述ESCs中的蛋白表达水平。设立正常ESCs(正常组)、异位ESCs(异位组);并选用DNMT3A典型低表达的异位ESCs,转染DNMT3A过表达慢病毒及对照慢病毒分别构建GV205Flag-DNMT3A/异位ESCs(阳性组)和GV205/异位ESCs(阴性组)转基因细胞;分别注射于用17-β雌激素缓释片颈部皮下包埋人工控制生理周期的裸鼠背部皮下,每组12只裸鼠,动态观察接种细胞的增殖生长情况。结果:(1)DNMT3A在异位ESCs中的蛋白表达水平显著低于对照组ESCs;(2)蛋白质印记法检测到DNMT3A在GV205Flag-DNMT3A/异位ESCs中高表达,确定转染成功;(3)以免疫组化法检测四组裸鼠细胞种植部位组织处人间质细胞特征性波形蛋白表达,均为阳性;(4)测量统计细胞接种部位瘤样组织,阳性组平均体积为15.375±9.546mm3,小于阴性组平均体积16.75±9.907mm3,比较无统计学差异(P0.05)。正常对照组平均体积为18.417±8.218mm3,显著小于异位组平均体积32±16.548mm3,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。异位组平均体积大于阴性组和阳性组,均有统计学意义(P0.05)。结论:(1)DNMT3A高表达能够抑制ESCs的增殖,减缓瘤样组织的生长,在整体动物水平上进一步表明DNMT3A在AM的发生发展过程中起重要作用;(2)本实验利用人ESCs接种至人工控制生理周期的裸鼠背部皮下进行整体动物实验,为相似疾病的动物实验研究提供参考。
【关键词】：DNMT3A 子宫腺肌病 子宫内膜间质细胞 整体动物实验
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R711.74
【目录】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-9
• 第1章 引言9-11
• 第2章 材料与方法11-24
• 2.1 主要材料及试剂11-12
• 2.2 仪器设备和产地12-13
• 2.3 实验步骤13-24
• 2.3.1 收集标本13
• 2.3.2 异位及正常对照ESCs的分离培养及鉴定13-15
• 2.3.3 蛋白质印记法检测异位及正常ESCs中DNMT3A蛋白表达情况15-19
• 2.3.4 DNMT3A过表达慢病毒载体感染异位ESCs19-20
• 2.3.5 蛋白质印记法检测GV205Flag-DNMT3A/异位ESCs中DNMT3A的蛋白表达情况(步骤同 2.3.3)20
• 2.3.6 裸鼠整体动物实验20-22
• 2.3.7 测量细胞种植部位瘤样组织的体积22-23
• 2.3.8 免疫组化法检测细胞注射部位瘤样组织的波形蛋白表达23
• 2.3.9 数据处理23-24
• 第3章 实验结果24-30
• 3.1 ESCs的细胞鉴定24
• 3.2 蛋白质印记法检测ESCs中DNMT3A的蛋白表达水平24-25
• 3.3 转基因细胞中DNMT3A的蛋白表达情况25-26
• 3.4 裸鼠整体动物实验26-30
• 3.4.1 裸鼠的饲养26
• 3.4.2 雌激素缓释片的颈部皮下包埋及细胞接种过程26-27
• 3.4.3 测量细胞接种部位瘤样组织体积27-29
• 3.4.4 免疫组化法检测细胞注射部位组织波形蛋白的表达29-30
• 第4章 讨论30-33
• 第5章 结论33-34
• 致谢34-35
• 参考文献35-38
• 综述38-49
• 参考文献45-49

【参考文献】

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本文编号：856683