甜菜碱对孕前灌酒雌鼠早期植入前胚胎H3K9乙酰化水平的影响

发布时间：2017-09-28 15:02

  本文关键词：甜菜碱对孕前灌酒雌鼠早期植入前胚胎H3K9乙酰化水平的影响

  更多相关文章： 酒精摄入 甜菜碱 雌鼠 植入前胚胎 H3K9乙酰化

【摘要】：胚胎发育受环境影响表现在妊娠过程中的任何环节,包括配子形成、胚胎发育、胎儿成熟等各种时期。女性长期过度饮酒,其后代会出现发育迟缓,身体畸形及精神行为异常等病症的几率大大增加。本实验采用体内冲胚法及体外胚胎培养技术获取各组卵母细胞及各期植入前胚胎,并使用亮甲酚蓝染色法及免疫荧光技术对各组卵母细胞活性和早期植入前胚胎H3K9乙酰化水平进行研究。同时也对各组实验动物肝脏及血清中的丙二醛(MDA)含量进行测定,以期为研究“胎儿酒精综合症"(FASD)的发病机理及人类优生优育提供一定的借鉴和参考。实验分组如下：对照组,摄入等剂量生理盐水；灌酒组Ⅰ,摄入20%酒精；甜菜碱组Ⅰ,摄入20%酒精+甜菜碱；灌酒组Ⅱ,摄入40%酒精；甜菜碱组Ⅱ,摄入40%酒精+甜菜碱。实验结果：1.甜菜碱组血清中的MDA含量低于灌酒组,高于对照组,且灌酒组ⅡMDA含量高于灌酒组Ⅰ,均差异显著(P0.05)；2.用26umol/1的亮甲酚蓝对雌鼠未成熟卵母细胞染色后,结果显示,与对照组相比,实验组小鼠未成熟卵母细胞G6PD活性降低,同时灌酒组下降幅度略高于甜菜碱组,差异不显著；3.各组MII期卵母细胞均未检测到H3K9乙酰化间接免疫荧光：体内灌酒组Ⅰ在桑葚胚期H3K9乙酰化水平高于对照组,囊胚期结果则相反；体外灌酒组Ⅰ各期胚胎H3K9乙酰化水平与对照组相比无明显差异,且两组各胚胎期H3K9乙酰化水平变化趋势基本相同；灌酒组Ⅱ植入前胚胎H3K9乙酰化水平与灌酒组Ⅰ相比,变化较大；甜菜碱对20%灌酒雌鼠早期植入前胚胎H3K9乙酰化水平干预程度较大,其体内、外大多数胚胎期的H3K9乙酰化水平均降低了。实验结论：1.丙二醛是脂质过氧化的中间产物,该指标能反映外源因子对机体的氧化损伤程度。灌酒组肝脏及血清中MDA含量上升,说明雌鼠长期过量饮酒可能会导致机体氧化还原系统失衡,肝脏及血清系统均受到了不同程度的氧化损伤；甜菜碱组小鼠肝脏和血清中MDA含量降低,说明甜菜碱缓解了酒精在机体内造成的的氧化应激,具有明显的抗氧化功能,但血清中甜菜碱组MDA含量均显著低于对照组；2.孕前雌鼠酒精摄入后其未成熟卵母细胞的G6PD活性降低了,且酒精浓度越大,活性越低,这可能与女性过度饮酒对生殖细胞产生了不利影响有关；甜菜碱可提高孕前酒精摄入雌鼠未成熟卵母细胞G6PD的活性；3.酒精对雌鼠早期植入前胚胎H3K9乙酰化水平的影响有剂量依赖性,酒精浓度越高,影响越大。甜菜碱可在一定程度上缓解酒精对雌鼠早期植入前胚胎H3K9乙酰化水平的影响；该研究或可为揭示雌鼠酒精摄入对胚胎发育的影响提供一些参考数据。
【关键词】：酒精摄入 甜菜碱 雌鼠 植入前胚胎 H3K9乙酰化
【学位授予单位】：安徽大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R714.2
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 第一章 文献综述9-17
• 1 酒精的毒理及其与哺乳动物胚胎发育的关系9-11
• 1.1 酒精的毒理9-10
• 1.2 酒精代谢与胚胎发育10-11
• 2 甜菜碱的生物学功能及其与酒精代谢的关系11-13
• 2.1 甜菜碱的生物学功能11-12
• 2.2 甜菜碱与酒精代谢12-13
• 3 表观遗传修饰及其作用机制13-14
• 4 组蛋白乙酰化与胚胎发育的关系14-15
• 4.1 组蛋白乙酰化的作用机制14-15
• 4.2 组蛋白乙酰化与胚胎发育15
• 5 本课题组研究现状15-17
• 第二章 甜菜碱对孕前灌酒雌鼠肝脏及血清MDA含量的影响17-25
• 引言17-18
• 1 实验材料与方法18-22
• 1.1 实验材料18-19
• 1.1.1 实验动物18
• 1.1.2 实验药品及耗材18-19
• 1.2 试剂配制19
• 1.2.1 0.01%考马斯亮蓝,4.7%乙醇,8.5%磷酸溶液的配制19
• 1.2.2 1mg/ml BSA溶液的配制19
• 1.3 实验方法19-22
• 1.3.1 动物分组及模型制作19-20
• 1.3.2 雌鼠10%肝脏组织匀浆和血清的制备20
• 1.3.3 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量绘制标准曲线20-21
• 1.3.4 MDA(丙二醛)试剂盒的操作步骤21-22
• 2 结果与结论22-24
• 2.1 甜菜碱对孕前不同浓度酒精摄入雌鼠体重的影响22-23
• 2.2 各处理组雌鼠肝脏组织匀浆及血清中MDA含量的测定结果23-24
• 3 小结24-25
• 第三章 甜菜碱对孕前灌酒雌鼠卵母细胞活性的影响25-34
• 引言25-26
• 1 实验材料与方法26-30
• 1.1 实验材料26-28
• 1.1.1 实验动物26
• 1.1.2 实验药品及耗材26-28
• 1.1.3 仪器设备28
• 1.2 试剂配制28-29
• 1.2.1 雌鼠超排激素的配制28
• 1.2.2 体外操作液hCZB的配制28-29
• 1.2.3 26umol/L BCB染色液的配制29
• 1.3 实验方法29-30
• 1.3.1 动物模型及分组29
• 1.3.2 雌鼠未成熟卵母细胞的收集29-30
• 1.3.3 未成熟卵母细胞的BCB染色步骤30
• 2 数据处理及统计分析30
• 3 实验结果30-32
• 3.1 雌鼠对照组未成熟卵与MII期卵母细胞BCB染色结果30-31
• 3.2 雌鼠各组未成熟卵母细胞BCB染色结果31-32
• 4 小结32-34
• 第四章 甜菜碱对孕前灌酒雌鼠植入前胚胎H3K9乙酰化水平的影响34-51
• 引言34-35
• 1 实验材料与方法35-41
• 1.1 实验材料35-37
• 1.1.1 实验动物35
• 1.1.2 实验药品及耗材35-37
• 1.1.3 仪器设备37
• 1.2 试剂配制37-39
• 1.2.1 雌鼠超排激素的配制37
• 1.2.2 胚胎操作液hCZB的配制37
• 1.2.3 植入前胚胎体外培养液G~-(CZB)/G~+的配制37-38
• 1.2.4 磷酸缓冲液PBS的配制38
• 1.2.5 免疫组化试剂配制38-39
• 1.3 实验方法39-41
• 1.3.1 动物分组及模型制作39
• 1.3.2 实验组及对照组MII期卵母细胞的收集39-40
• 1.3.3 体内受精胚胎及体外培养各时期胚胎的收集40
• 1.3.4 间接免疫荧光检测H3K9乙酰化的步骤40-41
• 2 数据处理及统计分析41
• 3 结果与分析41-48
• 3.1 雌鼠MII期卵母细胞H3K9乙酰化水平41-42
• 3.2 灌酒雌鼠体内各时期植入前胚胎H3K9乙酰化水平的半定量分析42-43
• 3.3 体内甜菜碱组及灌酒组各时期植入前胚胎H3K9乙酰化水平的半定量分析43-44
• 3.4 体内甜菜碱组及酒精组各时期植入前胚胎H3K9乙酰化免疫荧光图44-45
• 3.5 灌酒雌鼠体外各时期植入前胚胎H3K9乙酰化水平的半定量分析45-46
• 3.6 体外甜菜碱组及酒精组各时期植入前胚胎H3K9乙酰化水平的半定量分析46-47
• 3.7 体外甜菜碱组及酒精组各时期植入前胚胎H3K9乙酰化免疫荧光图47-48
• 4 小结48-51
• 结论51-52
• 参考文献52-60
• 附录60-62
• 致谢62-63
• 硕士期间发表论文63-64
• 硕士期间参与科研情况64

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 钟立霖;朱静;吴晓芸;陈国珍;孙慧超;杨雪芳;田杰;;乙醇及其代谢产物对心肌祖细胞的毒性及H3K9表突变作用[J];第三军医大学学报;2010年14期

2 干小英,刘庆生;甜菜碱和肉碱用于仔猪饲料效果的研究[J];国外畜牧科技;1997年04期

3 胡艳秋;蒋杞英;程相树;邓锦波;;孕期酒精暴露对子鼠海马神经元凋亡的影响[J];郑州大学学报(医学版);2007年05期

4 蒋杞英;胡艳秋;程相树;邓锦波;;孕期酒精接触对子鼠视皮质神经元凋亡的影响[J];解剖学报;2007年04期

5 王琳轶;田杰;钟立霖;吕铁伟;吴晓云;朱静;;姜黄素干预乙醇对心肌祖细胞H3K9的高乙酰化失衡及心脏发育相关基因表达异常[J];临床心血管病杂志;2011年04期

6 郭坤亮,季克良,王昌禄;酒精代谢及其相关基因遗传多态性[J];酿酒科技;2005年07期

7 潘博;孙慧超;吕铁伟;吴晓云;朱静;田杰;;酒精致小鼠胚胎心脏组蛋白H3K9高乙酰化失衡及其表突变[J];临床心血管病杂志;2013年05期

8 钟国清;甜菜碱及其应用[J];中国饲料;1997年03期

9 楼文珠;孙雪燕;李龙珠;宋梦婉;陶晶;郭俊明;;组蛋白脱乙酰酶抑制剂的抗癌作用[J];中国细胞生物学学报;2011年09期

10 蒋杞英;胡艳秋;吴萍;程相树;邓锦波;;妊娠期接触酒精对子鼠视皮质神经元数量的影响[J];中国药理学通报;2007年07期

，

本文编号：936481