宫颈癌相关成纤维细胞的分离与鉴定
发布时间:2017-09-30 22:24
本文关键词:宫颈癌相关成纤维细胞的分离与鉴定
更多相关文章: 宫颈肿瘤 肿瘤相关成纤维细胞 原代细胞培养 肿瘤微环境
【摘要】:目的宫颈癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAF)在宫颈癌的进展中起着重要作用,原代成纤维细胞培养与体内微环境更为接近。本研究旨在分离纯化并鉴定CAF,初步探讨CAF的生物学特性。方法选择郑州大学第一附属医院妇科2015-01-04-03-27收治的患者6例。用胶原酶消化法分离宫颈正常成纤维细胞(normal fibroblast,NF)和CAF;显微镜下观察细胞形态;用CCK-8法绘制生长曲线;ELISA法检测细胞上清中人转化生长因子β1(transforming growth factor betal 1,TGF-β1)的分泌水平;免疫荧光法及蛋白质印迹法检测细胞标志物波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)和成纤维细胞活化蛋白α(fibroblast activation proteinα,FAPα)。结果 CAF大小、形状不一,密度接触抑制消失;NF大小、形状一致,存在密度接触抑制。CAF的生长速度快于NF,z=-2.160,P=0.031。CAF中TGF-β1的浓度为(449.93±19.99)ng/L,而NF中为(209.50±16.25)ng/L,二者差异有统计学意义,z=-2.611,P=0.008。CAF高表达α-SMA和FAPα,而NF不表达α-SMA和FAPα,两者均表达Vimentin。结论成功分离纯化并鉴定CAF。CAF具有平滑肌和成纤维细胞双重特性,其增殖能力及细胞活性均强于NF。
【作者单位】: 郑州大学第一附属医院妇科·河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室;
【关键词】: 宫颈肿瘤 肿瘤相关成纤维细胞 原代细胞培养 肿瘤微环境
【基金】:河南省科技攻关重点项目(142102310538)
【分类号】:R737.33
【正文快照】: 中华肿瘤防治杂志,2016,23(3):171-175Chin J Cancer Prev Treat,2016,23(3):171-175最新研究表明,肿瘤-宿主微环境的平衡状态对肿瘤的发生发展起着重要作用[1]。肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAF)是肿瘤基质中的主要细胞类型,它们通过分泌多种细胞因子相
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