地西他滨促进宫颈腺癌Hela细胞凋亡和APC基因去甲基化研究
发布时间：2017-09-30 22:36
本文关键词：地西他滨促进宫颈腺癌Hela细胞凋亡和APC基因去甲基化研究
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【摘要】：目的:研究地西他滨对APC基因的表达水平和去甲基化的影响,及地西他滨对β-catenin蛋白的作用,探讨地西他滨诱导宫颈腺癌Hela细胞凋亡分子机制,为地西他滨应用于宫颈癌的临床治疗提供理论基础及实验依据。方法:(1)不同浓度的地西他滨作用于宫颈腺癌Hela细胞24h、36h和48h,MTT法检测对宫颈癌细胞的增殖抑制作用,观察地西他滨对Hela细胞增殖的浓度依赖效应和时间依赖效应。(2)Annexin V-HTC/PI双染法检测地西他滨对宫颈腺癌He La细胞凋亡的影响;流式细胞术检测地西他滨对宫颈腺癌He La细胞细胞周期的影响。(3)通过甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR,MSP)技术,在地西他滨作用于宫颈腺癌He La细胞后,检测APC基因的甲基化状态。(4)RT-PCR法检测地西他滨作用于He La细胞前后,APC基因m RNA表达水平。(5)Western blot检测地西他滨作用于He La细胞前后,APC蛋白、β-catenin蛋白在胞内及核内表达的变化。结果:1地西他滨对宫颈腺癌Hela细胞增殖抑制具有浓度依赖效应和时间依赖效应。2、地西他滨能够促进Hela细胞凋亡,凋亡率由处理前的12.41±0.24%上升至处理后73.82±0.11%,两者差异有有统计学意义(P0.05);地西他滨可以阻滞宫颈腺癌He La细胞于S和G2期。3地西他滨处理He La细胞后,APC基因启动子区域去甲基化状态明显增高。4、地西他滨处理宫颈腺癌He La细胞后,APC m RNA表达量上升,处理前后比较差异有统计学意义(P0.05)。5、地西他滨处理前He La细胞胞内APC蛋白相对表达量为0.780,处理后相对表达量为1.542;地西他滨处理前胞内β-catenin蛋白相对表达量为0.89,处理后相对表达量为0.354;地西他滨处理前核内β-catenin蛋白相对表达量为0.632,处理后相对表达量为0.336;处理前后比较,APC蛋白和β-catenin蛋白在胞内和核内的表达差异均有统计学意义(P0.05)。结论:1.地西他滨能以浓度和时间依赖方式抑制宫颈癌细胞的增殖。2.地西他滨具有促进宫颈腺癌Hela细胞凋亡的作用,导致细胞周期阻滞在S期和G2期。3.地西他滨可通过对APC基因的去甲基化作用,下调胞内APC蛋白表达,下调胞内和核内β-catenin表达,抑制WNT信号通路,诱导细胞宫颈癌细胞凋亡。
【关键词】：地西他滨 Hela细胞 甲基化 凋亡 宫颈癌
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33
【目录】：
- 主要英文缩略语索引5-7
- 中文摘要7-9
- Abstract9-11
- 一、前言11-15
- 二、材料与方法15-19
- 三、实验方法19-29
- 四、实验结果29-37
- 五、讨论37-43
- 六、结论43-45
- 参考文献45-51
- 综述 APC基因与肿瘤的关系51-59
- 参考文献54-59
- 读研期间发表的文章59-61
- 致谢61
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 李雪;孔为民;韩超;吴乾凤;康琳棣;;首都医科大学附属北京妇产医院1992-2011年间宫颈癌发病趋势分析[J];中华妇幼临床医学杂志(电子版);2013年03期
，本文编号：950848
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/fuchankeerkelunwen/950848.html
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