大鼠急性甲醇中毒脑组织单核细胞趋化蛋白-1和血管内皮生长因子的表达及意义

发布时间：2017-11-01 05:06

  本文关键词：大鼠急性甲醇中毒脑组织单核细胞趋化蛋白-1和血管内皮生长因子的表达及意义

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【摘要】：目的：复制急性高剂量、低剂量甲醇中毒大鼠模型,检测大鼠甲醇中毒后脑组织单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达变化,从形态学和分子生物学层面探讨大鼠急性甲醇中毒后脑组织MCP-1和VEGF的变化规律,为急性甲醇中毒的病理学研究提供一定的实验依据。 方法：90只成年健康SD (Sprague-Dawley)大鼠,不限雌雄、体重(280-±30)g。45只用于脑组织RNA和蛋白的提取,45只用于免疫组化实验。大鼠分为低剂量组、高剂量组和生理盐水组,给予各组大鼠吸入等比混合气体(N2O/O2),并分别灌胃低剂量甲醇溶液(1g/kg)、高剂量甲醇溶液(2g/kg)或生理盐水,各组又随机分成2h,12h,24h,3d,1w五个时间点(n=6)。右心耳取血,采用气相色谱法检测大鼠血液的甲醇浓度,然后取3只进行灌注固定,石蜡包埋切片和免疫组化染色；取3只断头处死,取大鼠脑皮层组织分别进行总RNA和蛋白的提取。总RNA经逆转录成cDNA后对MCP-1和VEGF两个目的基因的mRNA的表达进行实时荧光定量PCR分析,用Western blot对MCP-1和VEGF的蛋白表达变化进行定量分析。 结果：1.甲醇浓度检测结果：高剂量组在2h、12h、24h三个时间点的血液甲醇浓度与低剂量组和生理盐水组比较显著升高(p0.05),低剂量组在2h、12h两个时间点的血液甲醇浓度与生理盐水组比较显著升高(p0.05)。高剂量组和低剂量组在3d和1w及生理盐水组各时间点均未检测出甲醇,证明大鼠吸入混合气体(N20/02)并给予高、低剂量甲醇溶液灌胃后能够成功复制急性高、低剂量甲醇中毒大鼠模型。2.实时荧光定量PCR检测结果：①急性甲醇中毒后低剂量组和高剂量组不同时间点脑组织MCP-1mRNA表达均发生显著变化。2h明显升高(p0.05),24h达高峰,然后逐渐下降,但3d和1w仍高于对照组,差异有显著性(p0.05)。高剂量组MCP-1mRNA的表达水平在2h、3d和1w显著高于低剂量组(p0.05),两组在12h和24hMCP-1mRNA的表达无显著差异(p0.05)。②急性甲醇中毒后低剂量组和高剂量组不同时间点脑组织VEGFmRNA表达均发生显著变化。2h明显升高(p0.05),24h达高峰,24h后开始逐渐下降,3d和1w仍高于对照组,有显著性差异(p0.05)。高剂量组VEGF mRNA表达水平在2h和12h高于低剂量组(p0.05),其余时间点高、低剂量组差异无统计学意义(p0.05)。3.Western blot检测结果：①急性甲醇中毒后低剂量组和高剂量组MCP-1蛋白表达在12h明显升高(p0.01),24h达高峰,然后逐渐下降,3d仍高于对照组(p0.01)。高剂量组MCP-1蛋白表达在12h和24h高于低剂量组(p0.05),两组在3d MCP-1的蛋白表达无显著差异(p0.05)。②急性甲醇中毒后低剂量组和高剂量组VEGF蛋白表达在12h显著升高达到高峰(p0.01),24h和3d与12h相比有所降低,但仍明显高于对照组(p0.01),高剂量组VEGF蛋白表达在12h、24h和3d显著高于低剂量组(p0.01)。4.免疫组化实验结果：①对照组大鼠大脑未见明显MCP-1阳性表达,急性甲醇中毒后,高剂量组24h MCP-1阳性表达数增加,3d达高峰,和对照组相比有显著差异(p0.01),阳性表达多集中在基底节和梨状皮质,1w阳性反应减少,但与对照组相比仍有显著差异(p0.01)。②对照组大鼠大脑有少量阳性VEGF表达,急性甲醇中毒后,高剂量组24h VEGF阳性表达数显著增多(p0.01),阳性反应增强,3d达高峰,阳性表达主要集中在大脑皮质,1w阳性表达数减少,但和对照组相比仍有显著差异(p0.01)。 结论：大鼠急性甲醇中毒后,脑组织MCP-1和VEGF基因和蛋白表达显著增高并持续一定时期,可能参与了脑组织病理变化过程,程度与甲醇中毒剂量有关。
【关键词】：甲醇中毒 单核细胞趋化蛋白-1 血管内皮生长因子 大鼠
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R595.6
【目录】：

• 主要缩略语英文索引5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 引言10-14
• 材料与方法14-26
• 结果26-36
• 讨论36-41
• 结论41-42
• 参考文献42-46
• 文献综述46-53
• 参考文献51-53
• 研究生期间撰写及发表文章53-54
• 致谢54

【参考文献】

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本文编号：1125347