Ac-SDKP调节Rho GTP酶信号抑制皮肤肌成纤维细胞转化的作用及机制

发布时间：2020-06-18 00:21

【摘要】：目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(N-acetyl-seryl-aspartyllysyl-proline,Ac-SDKP)通过Rho GTP酶调节TGF-β1介导的皮肤肌成纤维细胞转化和迁移的作用及其机制。方法原代培养大鼠乳鼠皮肤成纤维细胞,取第二代细胞进行实验。实验分组:1空白对照组:无血清培养基培养;2 TGF-β1诱导组:无血清培养条件下,加入终浓度为100 nmol/L的TGF-β1诱导48h;3 Ac-SDKP预处理组:无血清培养条件下,先给予100 nmol/L的Ac-SDKP预处理1h,再给予TGF-β1诱导48h。划痕实验检测细胞迁移能力,免疫细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(TypeⅠcollagen,ColⅠ)、Ras相关的C3肉毒素底物(Ras related C3 botulin substrate 1,Rac1)、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(Rho associated coiledcoil forming protein kinase,ROCK)、细胞分裂周期蛋白42(cell division cycle 42,CDC42)、Ras同源基因家族成员A(Ras homolog gene family,member A,Rho A)蛋白的表达,Western-blot法检测α-SMA、血清应答因子(serum response factor,SRF)、心肌蛋白相关转录因子(myocardin related transcription factor A,MRTF-A)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Rac1、Rho A、ROCK、III型胶原(Type III collagen,Col III),和CDC42蛋白的表达。结果1细胞划痕实验显示,与空白对照组比较,TGF-β1诱导组细胞迁移至中央划痕区的距离明显增大;与TGF-β1诱导组相比,Ac-SDKP预处理组细胞迁移至中央划痕区的距离减小。2免疫细胞化学法结果显示,TGF-β1诱导组细胞中α-SMA、Rac1、ROCK、Rho A、CDC42和ColⅠ的阳性表达较空白对照组增强;而Ac-SDKP预处理组可明显抑制α-SMA、Rac1、ROCK、Rho A、CDC42和ColⅠ的阳性表达。3 Western-blot结果显示,TGF-β1诱导组的肌成纤维细胞转化相关蛋白α-SMA、ColⅠ、Col III、SRF和MRTF-A的表达较空白对照组分别上调1.8倍、2.8倍、2倍、1.69倍和1.76倍;Rho GTP酶相关蛋白Rac1、CDC42,ROCK和Rho A的表达较空白对照组分别上调2倍、1.43倍、1.78倍和2.21倍;而经AcSDKP预处理后的肌成纤维细胞转化相关蛋白α-SMA、ColⅠ、Col III、SRF和MRTF-A的蛋白表达较TGF-β1诱导组分别下降57%、36%、71%、67.76%和52.08%;Rho GTP酶相关蛋白Rac1、CDC42,ROCK和Rho A的表达也分别下调18.75%、51.52%、51.39%和23.81%(P0.05)。结论Ac-SDKP可能够通过调节Rho GTP酶信号,抑制TGF-β1介导的皮肤肌成纤维细胞转化和迁移,发挥其抗纤维化的作用。图10幅;表4个;参153篇。
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R641
【图文】：

成纤维细胞,皮肤,蛋白表达,情况

ColⅠ及ColIII表达水平均较低，给予TGF-β1刺激后，各蛋白的表达水平分别上调至对照组的1.8，2.8和2倍；而Ac-SDKP预处理组与TGF-β1诱导组比较，α-SMA，ColⅠ及ColIII分别下调57%，36%及71%（图1，表1）。免疫细胞化学检测结果显示，在皮肤（肌）成纤维细胞中，与对照组相比，在给予TGF-β1诱导后细胞内α-SMA和ColⅠ的表达呈强阳性，α-SMA呈纤丝状平行交叉排列，ColⅠ呈团块状堆积，给予Ac-SDKP干预组，与TGF-β1诱导组相比α-SMA和ColⅠ表达明显减弱（图2，3）。以上图片结果均经分析后得到相应的数据

成纤维细胞,皮肤,交叉排列,纤丝

给予TGF-β1诱导后细胞内α-SMA和ColⅠ的表达呈强阳性，α-SMA呈纤丝状平行交叉排列，ColⅠ呈团块状堆积，给予Ac-SDKP干预组，与TGF-β1诱导组相比α-SMA和ColⅠ表达明显减弱（图2，3）。以上图片结果均经分析后得到相应的数据，所得数据经统计学分析，均有意义（P＜0.05）。

【参考文献】