p75NTR基因敲除小鼠的疼痛敏感性评估

发布时间：2020-07-23 05:34

【摘要】：背景和目的:疼痛是能引起人生理、心理及情绪上不愉快的感受,伴有机体潜在性或实质上的组织损伤,它是个体的一种主观感受。疼痛不仅能影响患者日常生活、社会交往、睡眠与情绪,还能带来一系列生理、心理及社会问题。烧伤疼痛是指因烧伤造成机体皮肤、黏膜甚至深部组织的结构肌功能破坏,导致皮肤感受器和神经末梢受损、暴露或产生病理性变化等,以及在烧伤患者多种诊疗操作过程中带来的各种不愉快感受与体验。它可直接影响烧伤创面的愈合速度与质量,也可影响患者的预后与转归。p75NTR是一种低亲和力神经营养因子受体,属于肿瘤坏死因子(TNF)受体超家族成员,能同一系列的蛋白或辅酶结合从而介导相应的功能。p75NTR不仅能参与多种神经元细胞的存活、凋亡及神经轴突髓鞘的形成,还能作为辅助蛋白调节TrkA受体的反应。因前期实验主要研究p75NTR与TrkA在皮肤创面愈合中的相互作用,且p75NTR能否对疼痛敏感性及TrkA的含量产生影响,目前还没有明确的研究。因此本实验采用敲除皮肤角质形成细胞中p75NTR基因小鼠,选用TrkA作为检测指标,观察其在敲基因小鼠皮肤中的差异性表达,并采用神经轴突纤维特异性蛋白PGP9.5作为另一项检测指标,来观察敲基因小鼠皮肤中神经纤维含量的变化,评估敲基因小鼠对疼痛敏感性的变化,初步探讨p75NTR与皮肤疼痛的关系及其相关机制。方法:选用8-12w健康成熟的野生纯合雌鼠(WT)和p75NTR敲基因雌鼠(KO),体重20±2g,选用疼痛实验(热板试验和丙酮实验)来观察两组小鼠对疼痛敏感性的影响,研究P75NTR基因敲除小鼠对疼痛敏感性评估。取未做任何处理的野生纯合小鼠和敲基因小鼠皮肤进行免疫组织化学染色和Western blot,来分析TrkA蛋白和PGP9.5蛋白在敲基因小鼠中的差异性表达。结果:热板试验中将小鼠第一次舔后足的时间进行统计学分析,示KO组对伤害性热刺激引起的疼痛缩足反应时间更短(p0.001,n=13);丙酮试验中将小鼠爪抓剃毛区的次数进行统计学分析,示KO组对伤害性冷刺激引起的疼痛抓挠反应次数增加(p0.001,n=10);免疫组化结果显示p75NTR主要表达于表皮基底层,且在KO小鼠表皮中不表达;PGP9.5蛋白散在颗粒状分布于表皮基地层,且在KO小鼠表皮中表达呈强阳性;TrkA蛋白连续均匀的分布于表皮中,且在KO小鼠表皮中表达增多;Western blot实验结果表明,在KO小鼠中p75NTR蛋白不表达(p0.001,n=9),而TrkA蛋白表达水平升高(p0.01,n=9),PGP9.5蛋白表达水平明显升高(p0.001,n=9)。结论:敲基因小鼠皮肤中敲除了p75NTR基因;表皮细胞p75NTR基因敲除小鼠疼痛敏感性增高;表皮细胞p75NTR基因敲除小鼠皮肤组织中神经纤维末梢含量增多;表皮细胞p75NTR基因敲除小鼠皮肤组织中TrkA表达增加。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R644
【图文】：

免疫荧光染色,免疫荧光

图１皮肤组织Ｐ７５ＮＴＲ免疫荧光染Ａ逦Ｂ逡逑２５－１逦１５－１逡逑￣ｒ逦．逡逑２０－逦｜｜逦ｃ逡逑0逡逑ｏ＇逦０邋１０－ｉ邋ｊ，ｎ逦＇邋邋ｏ－Ｌ－１——．————逡逑ＷＴ逦ＫＯ逦ＷＴ逦ＫＯ逡逑

丙酮,小鼠,基因

图２疼痛实验Ａ热板试验Ｂ丙酮实验逡逑

蛋白,免疫组织化学染色

ＷＴ逦ＫＯ逡逑图３免疫组织化学染色ＩＨＣ邋（ｘ４００）逡逑Ｃｌ、Ｃ２邋ｐ７５ＮＴＲ邋蛋白邋Ｄ１、Ｄ２邋ＰＧＰ９．５邋蛋白邋Ｅｌ、Ｅ２邋ＴｒｋＡ邋蛋白逡逑ＷＴ逦ＫＯ逡逑ｇａｐｄｈ逦ｍｍｍ邋ｍｍｍ逦１0ｌ逦－＾－逡逑０．８－逡逑Ｐ７ＢＮＴＲ逦Ｓ°＇６＇逡逑

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