线粒体TrxR2参与缺氧预处理减轻大鼠颅脑损伤后氧化应激的实验研究

发布时间：2017-06-29 05:05

  本文关键词：线粒体TrxR2参与缺氧预处理减轻大鼠颅脑损伤后氧化应激的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：颅脑损伤已成为现代战争中士兵在战场上受伤的主要形式之一,也是神经外科日常最常见的疾病,其发生率呈逐年增加的趋势,原发性颅脑损伤一般与外界直接作用有关,多无法直接干预,继发性颅脑损伤其病理过程复杂,是临床治疗和干预的主要方向,氧化应激在继发性颅脑损伤的病理过程中发挥了重要的作用,硫氧还蛋白还原酶2 (Thioredoxin reductases 2, TrxR2)是线粒体内抗氧化应激的重要酶类,研究TrxR2在颅脑损伤后的表达变化及其干预措施可能会成为提高颅脑损伤救治的新靶点。第一部分线粒体TrxR2在大鼠颅脑损伤后皮质表达变化的实验研究目的 研究线粒体TrxR2在创伤性颅脑损伤大鼠皮质的表达变化；探究TrxR2在继发性脑损伤病理过程中的作用。方法 108只成年健康Sprague-Dawley级雄性大鼠,体重介于220 g～250 g之间,由安徽医科大学动物实验中心提供。随机分为对照组(Con组,n=12)、外伤组(TBI组,n=96),TBI组按又根据伤后不同时间点处死分为伤后1、3、6、12 h和1、3、7、14 d八个亚组,每组12只。采用改良的Feeney's自由落体打击装置制作颅脑损伤大鼠模型,各组动物模型分别于伤后相应时间点处死,对照组不做任何处理,直接处死。每组选6只大鼠直接冰上断头取脑,留取挫伤灶周围0.5 cm皮质脑组织,进行脑组织含水量及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、还原性谷胱甘肽(GSH)测定；并提取线粒体TrxR2蛋白进行Western-Blot检测及活性分析；另取6只大鼠4% 多聚甲醛心脏灌注后断头取脑,固定,脱水、石蜡包埋,连续冠状切片,进行免疫组化检测皮层组织TrxR2的表达分布以及神经元NeuN的表达情况。结果颅脑损伤后3 h TrxR2的表达量明显升高,至伤后1d达高峰,14d基本恢复至正常水平；颅脑损伤后3h～7d与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05); TrxR2的活性在伤后1h明显降低,伤后1d降至最低,14d基本恢复至正常水平。NeuN光密度在伤后1h开始降低,伤后3d达到最低,14d基本恢复至正常水平。TrxR2活性与神经元活性NeuN染色存在正相关(r=0.855,P0.05)；与TrxR2平均光密度、脑组织水含量及MDA含量呈负相关(r=-0.818,r=-0.824,r=-0.842,P0.05)；与SOD活性及GSH含量呈正相关(r=0.854,r=0.862,P0.05)。结论颅脑损伤后TrxR2蛋白表达增多,但其活性受到明显抑制,TrxR2的活性与脑组织水含量及氧化应激水平相反,而与神经元活性基本一致,因此着眼于提高颅脑损伤后TrxR2的表达活性,可一定程度抑制氧化应激水平,减轻继发性脑损伤,改善预后。第二部分：线粒体TrxR2参与缺氧预处理减轻大鼠颅脑损伤后氧化应激的实验研究目的通过观察缺氧预处理对大鼠颅脑损伤后挫伤灶周围Nrf2和TrxR2表达变化及活性的影响,探究线粒体TrxR2参与缺氧预处理减轻大鼠颅脑损伤后氧化应激的机制。方法SD健康成年雄性大鼠48只,随机分为假手术组(Sham)、缺氧预处理组(HPC)、颅脑损伤组(TBI)、缺氧预处理+颅脑损伤组(HP+TBI),每组各12只。采用低压氧舱处理3 d(-50 kPa、3 h/d)建立缺氧预处理大鼠模型,改良的Feeney'S自由落体打击装置制作颅脑损伤大鼠模型,伤后24h处死大鼠。四组均选用改良的神经功能评分(nNSS)观察大鼠伤后24 h的神经功能变化;取6只大鼠挫伤灶周围新鲜脑组织进行水含量测定及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)测定以及Nrf2的表达和TrxR2的表达及活性的检测。另取6只大鼠采用免疫组化染色检测皮层组织TrxR2以及神经元NeuN的表达情况,并进行统计学分析。结果缺氧预处理+颅脑损伤组Nrf2和TrxR2蛋白表达较颅脑损伤组明显升高(P0.05),同时HP+TBI组神经功能评分,脑组织含水量,细胞MDA水平较颅脑损伤组明显减低(P0.05),TrxR2活性、SOD及GSH水平以及NeuN神经元活性均高于颅脑损伤组(P0.05)。结论缺氧预处理可上调颅脑损伤后TrxR2的表达及活性,降低颅脑损伤后脑水肿及氧化应激的程度,提高神经元活性,减轻继发性脑损伤。
【关键词】：颅脑损伤 缺氧预处理 氧化应激 硫氧还蛋白还原酶
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R651.15
【目录】：

• 缩略词表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-15
• 第一部分 线粒体TrxR2在大鼠颇脑损伤后皮陵表达变化的实验研究15-37
• 1 材料与方法15-27
• 2 结果27-33
• 3 讨论33-36
• 4 结论36-37
• 第二部分 线粒体TrxR2参与缺氧预处理减轻大鼠烦脑损伤后氧化应激的实验研究37-51
• 1 材料与方法37-44
• 2 结果44-49
• 3 讨论49-50
• 4 结论50-51
• 全文总结51-52
• 参考文献52-55
• 附录55-56
• 致谢56-57
• 综述57-65
• 参考文献63-65

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 钱伟;钱志远;沈合春;郑达理;;大鼠颅脑损伤后脑NF-κB的活性和NF-κBmRNA表达的变化及意义[J];中华临床医师杂志(电子版);2013年05期

  本文关键词：线粒体TrxR2参与缺氧预处理减轻大鼠颅脑损伤后氧化应激的实验研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：496620