骨髓间充质干细胞对急性肝衰竭大鼠肠道屏障保护作用的研究

发布时间：2017-06-29 22:06

  本文关键词：骨髓间充质干细胞对急性肝衰竭大鼠肠道屏障保护作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究目的： 本课题采用贴壁培养法分离纯化大鼠BMSCs,探讨尾静脉移植BMSCs对急性肝衰竭大鼠肠道屏障的作用。 研究方法： 1.分离、培养、鉴定大鼠BMSCs； 2.制备不同TAA剂量诱导下急性肝衰竭肠道屏障损伤大鼠模型,观察死亡率,制作肝脏和回肠组织HE染色病理切片,选定TAA造模合适剂量； 3.制备急性肝衰竭肠道屏障损伤大鼠模型,干预组经尾静脉输入Brdu标记的BMSCs,模型组输入PBS液。于24h、48h、72h和96h分别处死大鼠,取腹主动脉血和回肠组织,检测内毒素、二胺氧化酶、TNF-α和IL-6水平及变化,制作回肠组织HE染色病理切片和冰冻切片； 4.设立干预死亡率观察组和模型死亡率观察组,观察大鼠死亡率。 研究结果： 1.所培养细胞呈均一梭形,漩涡状排列；具有对塑料底物黏附性；表达细胞表型CD29,不表达造血细胞表型CD34；体外具有分化为脂肪细胞的能力,且增殖能力强,可鉴定为BMSCs； 2.采用不同剂量TAA灌胃造模均可造成肝损伤,同时伴有肠道屏障损伤,300mg/(kg-d)是大鼠急性肝衰竭伴肠道屏障损伤模型建立的适宜造模剂量； 3.BMSCs可成功定植在大鼠受损肠道组织中； 4.干预组和模型组血浆内毒素、二胺氧化酶、TNF-α和IL-6水平均明显升高(P0.05)；除干预组二胺氧化酶48h与24h比较,无明显升高外(P0.05),干预组和模型组内毒素、二胺氧化酶、TNF-α和IL-6水平随时间增加不断升高(P0.05)；24h干预组与模型组内毒素水平无明显差异(P0.05),而48h、72h和96h,干预组内毒素水平明显低于模型组(P0.05)；24h和48h干预组与模型组二胺氧化酶水平无明显差异(P0.05),而72h和96h,干预组二胺氧化酶水平明显低于模型组(P0.05)；在4个时间点,干预组TNF-α和IL-6水平均明显低于模型组(P0.05)； 5.模型死亡率观察组死亡率为52%,高于干预死亡率观察组(P0.05)； 6.回肠组织Western blot结果,48h干预组与模型组IL-6水平无明显差异(P0.05),干预组TNF-α水平明显低于模型组(P0.05)。96h干预组TNF-α和IL-6水平均明显低于模型组(P0.05)； 7.干预组回肠组织病变程度比模型组更轻。研究结论： 1.贴壁培养法可获得较高纯度的BMSCs,并可最大限度保持细胞的活性； 2.TAA灌胃的适宜剂量为300mg/(kg-d),能成功建立急性肝衰竭肠道屏障损伤模型; 3.BMSCs可经大鼠尾静脉移植,早期进入肠道受损部位,为受损肠道屏障的修复,提供重要基础条件； 4.BMSCs经大鼠尾静脉移植,可明显降低急性肝衰竭大鼠血浆内毒素及二胺氧化酶水平,同时可以降低血浆和肠组织中TNF-α和IL-6等炎症因子水平,减轻肠道器质性损伤,降低死亡率,表明BMSCs早期移植干预,对急性肝衰竭大鼠肠道屏障损伤具有明显的保护作用。
【关键词】：骨髓间充质干细胞 急性肝衰竭 肠道屏障 保护
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R575.3
【目录】：

• 英文~.略词表5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-12
• 第一部分 大鼠BMSCs的分离、培养及鉴定12-20
• 实验材料12-14
• 实验方法14-16
• 实验结果16-20
• 第二部分 大鼠急性肝衰竭肠道屏障损伤模型的建立20-24
• 实验材料20
• 实验方法20-21
• 实验结果21-24
• 第三部分 大鼠BMSCs肠道组织内示踪及对ALF大鼠肠道屏障保护作用的研究24-47
• 实验材料24-26
• 实验方法26-30
• 实验结果30-47
• 讨论47-56
• 结论56-57
• 参考文献57-63
• 文献综述63-71
• 参考文献68-71
• 攻读学位期间发表文章71-72
• 致谢72

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王树芳;徐海英;邢雪琨;黄青松;李萌;李永海;;银杏叶提取物对急性肝衰竭大鼠肝脏Caspase-8的影响[J];湖北农业科学;2012年08期

2 王春妍;杨世忠;江海艳;;急性肝损伤大鼠肠源性内毒素血症形成机理及其作用的实验研究[J];临床肝胆病杂志;2007年02期

3 裴旭东;翟玉峰;张怀宏;;复方甘草酸苷对大鼠急性肝衰竭保护机制的研究[J];实用药物与临床;2012年08期

4 米德铭,张欣,张鹏宇,卢晓芳,余承高,倪若愚;药物对实验性肝功能衰竭大鼠胃酸分泌变化的影响[J];同济医科大学学报;1997年03期

5 刘登群;王锋超;董世武;王连友;徐辉;冉新泽;粟永萍;;供体骨髓来源干细胞在骨髓嵌合小鼠肠上皮中定植和分化研究[J];胃肠病学和肝病学杂志;2008年08期

6 徐智媛;尧颖;程宇;吴华美;尤丽英;杨晋辉;;急性肝衰竭大鼠血浆D-乳酸、二胺氧化酶和内毒素的变化及其意义[J];胃肠病学和肝病学杂志;2011年08期

7 潘巧玲;刘小静;叶峰;牛迎花;;TAA致大鼠急性肝衰竭的胃肠功能及病理改变[J];西安交通大学学报(医学版);2008年01期

8 王佩,吴锡铭;N-乙酰半胱氨酸对硫代乙酰胺致大鼠肝衰竭的防治作用[J];中国现代应用药学;2000年04期

9 郝彦琴;赵龙凤;贾因棠;陈杰;;骨髓间充质干细胞对急性肝衰竭大鼠肠源性内毒素血症的保护作用[J];中国药物与临床;2010年07期

10 周冬;朱枝祥;陈丁丁;;SD大鼠二胺氧化酶活力测定方法的研究[J];中国现代药物应用;2009年09期

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本文编号：499478