重组FN C端肝素结合域多肽对CLP诱导的脓毒血症小鼠巨噬细胞功能的影响

发布时间：2017-07-16 03:18

  本文关键词：重组FN C端肝素结合域多肽对CLP诱导的脓毒血症小鼠巨噬细胞功能的影响

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【摘要】：目的:利用小鼠盲肠结扎穿刺(CLP)诱导的脓毒血症动物模型,研究重组FN C端肝素结合域多肽(rh FNHC-36)对脓毒血症小鼠的保护作用,从单核巨噬细胞功能的角度研究其在脓毒血症中起保护作用的机制。方法:1.建立盲肠结扎穿刺脓毒血症模型小鼠腹白线处切开,在盲肠中点结扎,穿刺针在结扎处与盲肠远端中点穿刺,穿孔处挤出一滴粪便后将盲肠放回腹腔,分两层缝合切口。术后通过鉴定小鼠腹腔及血液中细菌的种类验证模型是否构建成功。2.rh FNHC-36对脓毒血症小鼠的保护作用实验小鼠分为正常组(Normal)、伪手术组(Sham)、盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)、rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36),治疗组于盲肠结扎穿刺术前半小时及术后1小时、2小时分别尾静脉注射40 mg/kg的rh FNHC-36,盲肠结扎穿刺组小鼠注射等体积的PBS作为对照。观察14天内rh FNHC-36对CLP诱导的脓毒血症小鼠生存率的影响;采用菌落培养并计数评估小鼠腹腔及血液巨噬细胞对细菌的杀灭、清除作用;计算CLP术后小鼠胸腺和脾脏指数;组织病理学检查肝脏、脾脏、肺脏的病理形态学改变,评估rh FNHC-36对脓毒血症小鼠的保护作用。3.rh FNHC-36对脓毒血症小鼠巨噬细胞功能的影响无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,贴壁培养4小时后进行巨噬细胞鉴定,制备单细胞悬液,加入细菌脂多糖LPS(1μg/m L)刺激18个小时以诱导巨噬细胞的分化;ELISA法检测小鼠血浆中IL-6的含量;Griess试剂盒检测血清及巨噬细胞培养上清NO的水平;Transwell小室检测巨噬细胞趋化功能的变化;流式细胞术检测巨噬细胞表面抑制性配体PD-L1的表达。结果:1.成功建立盲肠结扎穿刺模型造模后小鼠表现为体重明显减轻,竖毛、寒战、腹泻,心率加快,喜独居等;对模型小鼠进行解剖,发现其盲肠末端缺血、变黑坏死,伴有弥漫性脓肿及大面积粘连。rh FNHC-36治疗组小鼠生理情况明显优于盲肠结扎穿刺组,经菌群鉴定,腹腔及血液中均以E.coli-inactive及A.lwoffii为主,从而证实血中细菌来源于腹腔,脓毒血症模型建立成功。2.rh FNHC-36对脓毒血症小鼠具有保护作用14天内正常组(Normal)以及伪手术组(Sham)均无小鼠死亡,盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)小鼠的死亡率达70%,rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36)小鼠的死亡率为50%,差别有显著意义(P0.05);正常组(Normal)以及伪手术组(Sham)小鼠腹腔及血液中均未检测到细菌菌落生长,盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)小鼠血液及腹腔中菌落计数分别为3.4×10^4±3.9×10^3个/ml、3.9×10^4±1.0×10^4个/ml,rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36)小鼠血液及腹腔中菌落计数分别为1.4×10^3±2.1×10^2个/ml、4.0×10^3±3.3×10^3个/ml,差别有显著意义(P0.01);伪手术组(Sham)与正常组(Normal)小鼠的脾脏及胸腺指数无明显差异,盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)小鼠术后6h及24h脾脏指数分别为的3.0±0.4、2.9±0.5,rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36)小鼠术后6h及24h脾脏指数分别为的3.6±0.5、4.2±0.6,差别有显著意义(P0.05);盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)小鼠术后6h及24h胸腺指数分别为的1.6±0.3、0.8±0.2,rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36)小鼠术后6h及24h胸腺指数分别为的2.7±0.5、1.8±0.2,差别有显著意义(P0.05);病理组织学观察发现盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)小鼠肝、脾、肺可出现广泛的炎症细胞浸润、变性及坏死,而rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36)小鼠肝、脾、肺仅见局灶性的炎症细胞浸润。3.rh FNHC-36增强脓毒血症小鼠巨噬细胞功能正常组(Normal)小鼠巨噬细胞培养上清NO的浓度为4.2±1.6umol/L,伪手术组(Sham)小鼠巨噬细胞培养上清NO的浓度为4.6±1.1umol/L。盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)小鼠巨噬细胞培养上清NO的浓度为13.4±3.3umol/L,rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36)小鼠巨噬细胞培养上清NO的浓度为4.4±3.2umol/L,差别有显著意义(P0.01);正常组(Normal)与伪手术组(Sham)小鼠血浆IL-6浓度分别为(6.3±6.3)pg/ml、(181±42)pg/ml,盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)小鼠血浆IL-6的浓度为(64000±29000)pg/ml,rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36)小鼠血浆IL-6的浓度为(19000±19000)pg/ml,差别有显著意义(P0.05);盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)小鼠的巨噬细胞趋化指数为3.8±0.9,rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36)小鼠的巨噬细胞趋化指数为7.8±1.9,差别有显著意义(P0.05);正常小鼠(Normal)腹腔巨噬细胞LPS刺激后PD-L1阳性率为69.0±10.9%,盲肠结扎穿刺组(CLP+PBS)小鼠的巨噬细胞表面PD-L1阳性率为91.5%±3.2%,rh FNHC-36治疗组(CLP+rh FNHC-36)小鼠的巨噬细胞表面PD-L1阳性率为80.4%±3.9%,差别有显著意义(P0.05)。结论:rh FNHC-36对CLP诱导的脓毒血症小鼠具有保护作用,可能是通过下调内毒素引起的IL-6及NO水平的升高,促进巨噬细胞趋化功能,下调巨噬细胞表面PD-L1的表达起到保护作用。
【关键词】：纤维连接蛋白 肝素结合域多肽 脓毒血症 巨噬细胞 小鼠
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R459.7
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-12
• 第一部分 重组FNC端肝素结合域多肽对CLP诱导脓毒血症小鼠的保护作用12-27
• 1.1 实验材料12-14
• 1.2 实验方法14-17
• 1.3 结果17-24
• 1.4 讨论24-27
• 第二部分 重组FN C端肝素结合域多肽对小鼠巨噬细胞功能的影响27-42
• 2.1 实验材料27-29
• 2.2 实验方法29-33
• 2.3 结果33-39
• 2.4 讨论39-42
• 结论42-43
• 参考文献43-46
• 综述46-52
• 参考文献50-52
• 致谢52

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 郭江睿;陈元仲;;纤维连接蛋白在肿瘤及抗感染研究的进展[J];福建医科大学学报;2006年06期

2 薛明;侯志明;张颖;艾红军;;牛血浆纤维黏连蛋白抑制大鼠成骨细胞凋亡的实验研究[J];口腔医学;2007年05期

中国硕士学位论文全文数据库 前6条

1 崔建国;白毛藤生物碱抗菌抗病毒及免疫药理学研究[D];湖南农业大学;2005年

2 杨惠麟;白毛藤多糖的提取及其药效学的初步研究[D];湖南农业大学;2006年

3 郭江睿;纤维连接蛋白及重组FN肝素结合域多肽对血小板减少内毒素血症小鼠治疗作用的初步研究[D];福建医科大学;2006年

4 张敕;纤连蛋白及其重组肝素结合域多肽对血管内皮细胞损伤的影响[D];福建医科大学;2008年

5 陈小芳;重组纤维连接蛋白C端及N端肝素结合域两种多肽的制备及其对小鼠败血症治疗作用的研究[D];福建医科大学;2008年

6 郑雪萍;重组纤维连接蛋白N端及C端肝素结合域多肽对大肠杆菌感染败血症小鼠模型的治疗作用研究[D];福建医科大学;2009年

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本文编号：546898