miR-132在脓毒症肺损伤小鼠中的保护作用及机制研究

发布时间：2017-09-02 23:19

  本文关键词：miR-132在脓毒症肺损伤小鼠中的保护作用及机制研究

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【摘要】：目的:观察脓毒症肺损伤小鼠肺组织中mi R-132的动态表达变化以及肺内上调mi R-132的表达后对胆碱酯酶及炎症反应的影响,探讨mi R-132对脓毒症肺损伤小鼠的肺保护作用及机制。方法:1.选择雄性健康SPF级BABL/c小鼠;采用盲肠结扎穿孔术(CLP)构建小鼠脓毒症肺损伤模型,模型构建成功后,病理切片检测肺损伤程度;ELISA检测肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α、IL-1β、IL-6炎症因子的表达变化;计算肺湿干重比值;用RT-q PCR检测肺组织中mi R-132的表达变化;用Western blot检测肺组织Ach E蛋白含量变化;T-CHE试剂盒检测BALF中Ach E活性。2.选择气管内滴入in vivo-jet PEITM介导的mi R-132,转染成功后采用CLP构建脓毒症肺损伤模型,造模24小时后处死小鼠。留取左肺行肺泡灌洗,用ELISA检测BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6炎症因子的表达变化;留取右肺,病理切片观察肺损伤程度,称量、烘干,计算湿干重比值,用RT-q PCR检测肺组织中mi R-132的表达变化,用Western blot检测肺组织Ach E蛋白含量变化,T-CHE试剂盒检测BALF中Ach E活性。结果:1.CLP能够成功构建脓毒症肺损伤模型,病理结果显示造模6 h小鼠开始出现肺损伤,损伤程度随时间延长而逐渐加重,24 h小鼠肺损伤最严重;肺湿干重比值在CLP术后6 h开始增加,肺水肿逐渐加重,24 h肺水肿最严重,随后肺水肿逐渐减轻;BALF中炎症因子表达量在CLP术后逐渐增加,TNF-α表达于12 h、24 h达高峰,IL-1β、IL-6于24 h达高峰,48 h后均开始逐渐下降。2.脓毒症会诱导肺组织mi R-132表达上调,CLP术后6 h开始,mi R-132的表达量逐渐升高,12 h、24 h达高峰(13.27±1.21倍、14.31±1.24倍),48 h开始下降。3.经气道内滴入in vivo-jet PEITM介导的mi R-132能够成功上调肺内的mi R-132的表达,转染后24 h表达达高峰;病理结果示转染组脓毒症小鼠肺损伤程度较假转染组减轻;肺组织水肿减轻;BALF中炎症因子表达下降,上调肺内mi R-132能够降低脓毒症肺损伤小鼠的肺部炎症反应。4.脓毒症肺损伤模型构建成功后发现肺组织中Ach E表达随CLP术后时间延长而逐渐增加,BALF中Ach E活性亦增加;上调肺内mi R-132后肺组织中Ach E蛋白表达及BALF中Ach E活性受抑制,提示mi R-132可能通过抑制Ach E蛋白表达,减少对抗炎物质Ach的水解,增强胆碱能抗炎活性。结论:肺内上调mi R-132能够减轻脓毒症小鼠肺损伤程度,减轻肺部炎症反应,具有肺保护作用,作用机制可能与mi R-132靶向Ach E,抑制Ach E对Ach的水解作用,从而增强胆碱能抗炎通路的抗炎活性有关。
【关键词】：微小RNA-132 脓毒症 转染 胆碱能抗炎通路
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R459.7
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 主要英文缩略词表11-12
• 第1章 引言12-15
• 第2章 材料与方法15-29
• 2.1 实验材料15-17
• 2.1.1 小鼠15
• 2.1.2 主要试剂15-16
• 2.1.3 主要仪器与设备16-17
• 2.2 器材准备及试剂配制17-18
• 2.2.1 去RNA酶处理17
• 2.2.2 Western Blot相关试剂配制17-18
• 2.3 实验方法18-20
• 2.3.1 小鼠脓毒症肺损伤模型构建18-19
• 2.3.2 气道内滴入法上调肺内mi R-132的表达19-20
• 2.4 检测指标20-28
• 2.4.1 肺组织湿干重比值测定20-21
• 2.4.2 肺组织常规HE染色病理检测21
• 2.4.3 RT-q PCR检测肺组织中mi R-132表达变化21-25
• 2.4.4 ELISA检测BALF中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6 表达变化25
• 2.4.5 Western blot检测肺组织中Ach E蛋白表达变化25-27
• 2.4.6 T-CHE测试盒检测BALF中Ach E的活性27-28
• 2.5 统计学分析28-29
• 第3章 结果29-38
• 3.1 脓毒症肺损伤小鼠模型构建29-31
• 3.1.1 术后一般表现29
• 3.1.2 病理结果29
• 3.1.3 肺组织湿干比29-30
• 3.1.4 脓毒症肺损伤小鼠BALF中炎症因子的变化30-31
• 3.2 MIR-132在脓毒症肺损伤小鼠肺组织中的动态变化31-32
• 3.3 肺内上调MIR-132后，脓毒症肺损伤小鼠肺内炎症的变化32-35
• 3.3.1 选择最佳转染时间点32-33
• 3.3.2 肺内上调mi R-132后各组肺组织病理变化33
• 3.3.3 肺内上调mi R-132后各组肺湿干重比值变化33
• 3.3.4 肺内上调miR-132后各组BALF中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6 的变化33-35
• 3.4 MIR-132对脓毒症肺损伤保护作用的机制研究35-38
• 3.4.1 脓毒症肺损伤小鼠肺组织内Ach E蛋白表达及BALF中Ach E活性变化35-36
• 3.4.2 肺内上调mi R-132后肺组织中Ach E蛋白表达及BALF中Ach E的活性变化36-38
• 第4章 讨论38-42
• 4.1 CLP术构建小鼠脓毒症肺损伤模型38
• 4.2 MIR-132对脓毒症肺损伤小鼠的肺保护作用38-40
• 4.3 MIR-132对脓毒症肺损伤小鼠的肺保护作用机制40-42
• 第5章 结论与展望42-43
• 5.1 结论42
• 5.2 进一步工作的方向42-43
• 致谢43-44
• 参考文献44-48
• 攻读学位期间的研究成果48-49
• 综述49-55
• 参考文献53-55

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 刘芬;江榕;李勇;曾振国;赵宁;夏亮;聂成;钱克俭;;微小RNA-132在脂多糖诱导大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应中的表达变化[J];中华危重病急救医学;2014年02期

2 高戈;冯U，

本文编号：781484