小剂量TNF-α预处理骨髓间充质干细胞移植对猪急性心肌梗死后心功能的影响

发布时间：2017-09-03 10:35

  本文关键词：小剂量TNF-α预处理骨髓间充质干细胞移植对猪急性心肌梗死后心功能的影响

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【摘要】：背景急性心肌梗死是一种严重的心血管疾病,具有发病急、病死率和致残率高等特点,给患者和家庭带来严重的经济和精神负担,因此针对心肌梗死的治疗成为医学界关心和研究的焦点。自Orlic等[1]利用干细胞治疗冠心病以来,骨髓间充质干细胞已被广泛应用于心肌梗死的治疗,虽然取得了一定的疗效,总体治疗效果仍然差强人意。如何提高BMSCs的治疗效果,以及BMSCs发挥治疗作用的机制仍需更加深入的研究。目的1.分离、培养、鉴定骨髓间充质干细胞。2.探讨TNF-α预处理骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)移植对猪急性心肌梗死后心功能的影响,小剂量TNF-α是否可以提高BMSCs对心肌梗死的治疗效果,为心肌梗死的干细胞治疗提供理论依据。方法1.利用密度梯度离心法分离猪骨髓间充质干细胞,体外培养、传代,通过检测细胞表面抗原及定向诱导分化潜能,鉴定BMSCs。2.12头巴马香猪,随机分为TNF-α预处理组、BMSCS组和对照组,利用心导管介入球囊封堵左冠状动脉前降支方法,建立心肌梗死模型。预处理组经导管注入DAPI标记过的TNF-α预处理后BMSCs; BMSCs组注入DAPI标记过的BMSCs;对照组注入等量无菌培养基。造模前、术后1w、2w、3w、4w采取血标本,提取血清,酶联免疫吸附法(enzyme-linked immune sorbent, Elisa)检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-a, TNF-α)浓度,术前、术后4w行超声心动图检测心功能变化,术后4w处死动物,HE、Masson染色观察梗死区组织学变化,Ⅷ因子免疫组化染色比较新生血管变化,荧光显微镜下观察移植细胞分布情况,Ⅷ因子免疫荧光染色,观察移植细胞与Ⅷ因子表达情况。结果1.密度梯度离心法获得原代BMSCs量比较少,接种后贴壁生长,大部分呈梭形,接种后1周以内生长缓慢,12-14天进行第一次传代,3代后生长速度加快,形态比较均一呈长梭形,旋涡状或辐射状排列。免疫荧光检测显示高表达CD29,不表达CD34。取第3代细胞进行体外定向诱导分化,可成功分化为骨细胞和脂肪细胞。2.总计12头动物参与造模。成功率100%。术前各组动物心功能均正常,无差异。心梗后4周,预处理组及BMSCs组心功能较对照组明显改善,差异有显著意义,(P0.05)；预处理组左室射血分数较BMSCs组有明显改善,差异有统计学意义(P0.05)。3.HE及Masson染色结果显示预处理组梗死区形态改变好于其他各组。4.预处理组Ⅷ因子及血管内皮生长因子(VEGF)表达率均高于MSCS组和对照组。5.预处理组TNF-a表达量高于对照组,差异显著(P0.05)；心梗后第2周、3周,预处理组高于BMSCs组,BMSCs组高于对照组,差异显著(P0.05)。结论BMSCs在体外诱导条件下易分化为软骨细胞、脂肪细胞。BMSCs经小剂量TNF-a预处理后,可提高其在梗死心肌中存活率,减轻梗死区炎症反应,更加明显的促进梗死区血管再生,能够更好地改善心功能。
【关键词】：骨髓间充质干细胞 肿瘤坏死因子-α 急性心肌梗死 移植 心功能
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R542.22
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 材料与方法11-26
• 结果26-31
• 讨论31-34
• 小结34-35
• 附图35-39
• 参考文献39-43
• 综述：骨髓间充质干细胞研究进展43-61
• 参考文献53-61
• 附录61-62
• 攻读学位期间发表文章情况62-63
• 致谢63-64
• 个人简历64

【参考文献】

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中国博士学位论文全文数据库 前1条

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本文编号：784525