东亚钳蝎毒素BmP01的疼痛活性研究

发布时间：2017-09-20 02:12

  本文关键词：东亚钳蝎毒素BmP01的疼痛活性研究

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【摘要】：被蝎子蛰刺引起的剧烈疼痛是一种常见的临床症状,到目前为止,没有一种很好有效的方法来缓解这种疼痛,重要原因之一是人们对这种疼痛产生的诱因知之甚少。本论文中我们从东亚钳蝎(Buthus martensii Karsch, BMK)的毒液中分离纯化到一个可以引起疼痛反应的毒素BmP01,这是一个已经报道过能抑制几种电压门控型K+通道亚型的毒素。BmP01是一条由29个氨基酸残基构成的多肽,其氨基酸序列为：ATCEDCPEHCATQNARAKCDNDKCVCEPK。这29个氨基酸残基中包含有6个半光氨基酸残基,形成3对二硫键,且配对方式为Cys1-Cys4, Cys2-Cys5, Cys3-Cys6,是典型的ICK (inhibitor cystine knot)模式。实验表明BmP01是通过激活TRPV1通道(transient receptor potential vanilloid 1 ion channel)这个众所周知的疼痛感受器来诱导疼痛反应的。在小鼠足底注射疼痛动物模型中,当在小鼠后爪心注入毒素BmP01后5 min内,可以诱导正常小鼠产生显著的急性疼痛,而在TRPV1基因敲除的小鼠上没有作用。在膜片钳电生理实验中,毒素BmP01能引起正常小鼠背根神经节(dorsal root ganglion, DRG)动作电位的变化而在TRPV1基因敲除的小鼠DRG上没有影响,这一结果表明：1)毒素BmP01是蝎子毒液中能引起疼痛的成分之一；2)毒素BmP01是通过作用于TRPV1通道诱发疼痛的。据我们所知,这是首次报道蝎毒液中能引起疼痛的多肽分子,对该分子的结构与功能的研究将为治疗蝎蛰刺之后引起的疼痛症状提供理论依据。
【关键词】：东亚钳蝎蝎毒素 BmP01 TRPV1 K~+通道 疼痛
【学位授予单位】：昆明理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R646
【目录】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-10
• 英文缩略词列表10-13
• 第一章 绪论13-26
• 1.1 东亚钳蝎简介13-14
• 1.2 蝎神经毒素概述14-19
• 1.2.1 蝎毒中短链神经毒素14-16
• 1.2.2 蝎毒中的长链多肽16-19
• 1.3 TRP通道家族19-24
• 1.3.1 TRP通道的种类19-20
• 1.3.2 TRP通道特点20-24
• 1.4 论文的选题意义以及研究内容24-26
• 1.4.1 论文选题意义24-25
• 1.4.2 研究内容25-26
• 第二章 东亚钳蝎蝎毒素提取和分离纯化26-36
• 2.1 实验材料和方法26-30
• 2.1.1 实验材料26-27
• 2.1.2 东亚钳蝎蝎粗毒的提取27-28
• 2.1.3 凝胶过滤层析分离蝎粗毒28-29
• 2.1.4 蝎毒分子筛层析样品疼痛活性测定29
• 2.1.5 RP-HPLC分离纯化蝎毒分子筛Ⅲ号峰29-30
• 2.1.6 RP-HPLC分离纯化蝎毒SVTX-Ⅲ-1g130
• 2.1.7 蝎毒SVTX-Ⅲ-1g1-3分子量的测定30
• 2.2 实验结果30-35
• 2.2.1 东亚钳蝎粗毒分子筛层析结果30-32
• 2.2.2 蝎毒分子筛Ⅲ号峰分离纯化结果32-33
• 2.2.3 蝎毒SVTX-Ⅲ-1g1样品RP-HPLC分离纯化结果33-34
• 2.2.4 SVTX-Ⅲ-1g1-3分子量的测定结果34-35
• 2.3 讨论35-36
• 第三章 毒素BmP01序列结构及初步活性测定36-47
• 3.1 实验材料和方法36-42
• 3.1.1. 实验材料36-37
• 3.1.2 毒素BmP01蛋白序列测定37
• 3.1.3 毒素BmP01核酸序列测定37-41
• 3.1.4 毒素BmP01三维结构测定41
• 3.1.5 毒素BmP01活性测定41-42
• 3.2 实验结果42-45
• 3.2.1 BmP01的氨基酸序列42-43
• 3.2.2 BmP01的核酸序列43-44
• 3.2.3 BmP01的三维结构44
• 3.2.4 BmP01在DRG上的活性44-45
• 3.3 讨论45-47
• 第四章 毒素BmP01的TRP通道活性研究47-57
• 4.1 实验材料和方法47-52
• 4.1.1 实验材料47-48
• 4.1.2 BmP01的K~+通道和TRP通道活性48-51
• 4.1.3 BmP01的疼痛模型实验51-52
• 4.2 实验结果52-55
• 4.2.1 BmP01的K~+通道活性52-53
• 4.2.2 BmP01的TRPV1通道活性53-54
• 4.2.3 BmP01对疼痛的影响54-55
• 4.3 讨论55-57
• 第五章 总结与展望57-61
• 5.1 总结57-58
• 5.2 展望58-61
• 参考文献61-72
• 致谢72-73
• 附录A：培养基与溶液配方73-77
• 附录B：攻读硕士期间已发表和待发表论文77

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 Zhi-Yong DI;Zi-Zhong YANG;Shi-Jin YIN;Zhi-Jian CAO;Wen-Xin LI;;History of study,updated checklist,distribution and key of scorpions (Arachnida:Scorpiones) from China[J];动物学研究(英文版);2014年01期

2 余茂耘,韦传宝;蝎毒的生理活性成分及临床应用[J];中国临床康复;2004年09期

3 Feng Jiang;Li-Ming Hua;Yun-Lu Jiao;Pin Ye;Jin Fu;Zhi-Jun Cheng;Gang Ding;Yong-Hua Ji;;Activation of mammalian target of rapamycin contributes to pain nociception induced in rats by BmK I, a sodium channel-specific modulator[J];Neuroscience Bulletin;2014年01期

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本文编号：885279