姜黄素对Prdx6调控在口腔鳞状细胞癌增殖中的作用

发布时间：2020-03-26 16:45

【摘要】：究目的:口腔鳞状细胞癌是头颈部发病率最高的恶性肿瘤,由于其发病机制目前为止尚未完全阐明,治疗方式主要以手术治疗和化疗为主,其五年生存率不超过50%。姜黄素是从姜黄中提取的一种天然化合物,广泛应用于肺部炎症、恶性肿瘤等疾病的治疗。研究表明姜黄素可以通过多种途径抑制肿瘤的增殖、血管生成、侵袭和转移,进而干预肿瘤的发生发展,但姜黄素对抗肿瘤的具体机制尚未完全阐明。过氧化物酶6(Peroxiredoxin 6,Prdx6)是过氧化物酶家族中的成员之一,具有过氧化物酶和磷脂酶A_2的双重活性。临床研究表明Prdx6在口腔鳞状细胞癌组织中高度表达,提示Prdx6可能在口腔鳞状细胞癌发生发展中发挥重要作用。本课题探究姜黄素对Prdx6调控在口腔鳞状细胞癌增殖中的作用,为进一步阐明姜黄素对抗肿瘤以及防治口腔鳞状细胞癌,提供新的理论依据和实验基础。研究方法:以CAL27细胞为实验对象,选用不同浓度的姜黄素(0、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L)、Prdx6 siRNA和Prdx6磷脂酶A_2活性抑制剂MJ33进行干预。MTS法检测细胞活性,细胞克隆形成实验检测细胞克隆增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡率,DCFH-DA探针检测活性氧水平,实时荧光定量PCR检测Prdx6 mRNA表达的变化,Western blot检测Prdx6蛋白表达的变化。研究结果:1、不同浓度的姜黄素(0、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L)处理CAL27细胞24h、48h、72h后,其细胞活性明显被抑制并呈剂量依赖性;40μmol/L的姜黄素作用CAL27细胞10d后,细胞克隆形成数目及大小均被明显抑制;40μmol/L的姜黄素作用CAL27细胞48h后,细胞凋亡率显著增加;不同浓度的姜黄素(0、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L)处理CAL27细胞6h后,随着浓度的增加CAL27细胞ROS水平逐渐升高。2、不同浓度的MJ33(0、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L)处理CAL27细胞24h、48h、72h和10d后,浓度为40μmol/L的MJ33可以明显抑制细胞活性;随着浓度的增加,细胞克隆形成数目及大小均受到明显的抑制;不同浓度的MJ33(0、40μmol/L、60μmol/L、80μmol/L)处理CAL27细胞6h和24h后,随着浓度的增加,细胞的ROS水平显著升高,细胞的凋亡率显著增加。3、荧光显微镜结果显示Prdx6 siRNA转染效率约80%;实时荧光定量PCR和Western blot结果显示,Prdx6 siRNA转染CAL27细胞36h和48h后,与阴性对照组相比,在mRNA水平上,Prdx6在CAL27细胞的表达量下降约70%;在蛋白水平上,Prdx6在CAL27细胞的表达量下降约50%。4、Prdx6 siRNA转染CAL27细胞48h后,与阴性对照组相比,CAL27细胞细胞活性显著被抑制,ROS水平显著升高;而Prdx6 siRNA转染CAL27细胞10d后,与阴性对照组相比,细胞克隆形成数目及大小均显著被抑制。5、实时荧光定量PCR和Western blot结果显示,40μmol/L姜黄素作用于CAL27细胞6h和24h后,Prdx6的mRNA和蛋白表达显著降低。研究结论:姜黄素通过下调Prdx6的表达进一步升高ROS的水平促进口腔鳞状细胞癌的凋亡进而抑制其增殖。
【图文】：

第 3 章 实验结果第 3 章 实验结果3.1 不同浓度的姜黄素对 CAL27 细胞活性的影响CAL27 细胞经过不同浓度姜黄素（0、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L）处理 24h、48h、72h 后，MTS 结果显示姜黄素能够显著降低 CAL27 细胞的存活率，其抑制作用随着姜黄素浓度的增加而增加呈剂量依赖性。同样，当姜黄素浓度为 40μmol/L 处理不同时间（24h、48h、72h），CAL27细胞的存活率随着时间的延长而降低。上述结果显示，姜黄素在体外能够显著抑制 CAL27 细胞活性，并呈剂量依赖性。

第 3 章 实验结果间（24h、48h、72h）对 CAL27 细胞活性的影响。每次实验 3 个复孔，每组实验独立重复 次，*，，P<0.05；***，P<0.001。3.2 姜黄素对 CAL27 细胞增殖的影响细胞克隆形成实验结果显示如图 3.2，与对照组相比较，浓度为 40μmol/L 的姜黄素处理 10d 后，CAL27 细胞的克隆能力明显下降、克隆数目显著减少。同在显微镜下观察可发现细胞的增殖能力明显减弱。Control Curcumin 40μmol/L
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.8

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本文编号：2601691