人牙胚发育分化时期及其上皮细胞成牙潜能的研究

发布时间：2020-03-27 11:03

【摘要】：近年来利用干细胞进行牙齿再生研究已经成为组织工程研究领域的热点,其中干细胞的诱导分化成为研究的重点问题。牙齿发育过程涉及诸多基因的调控,许多的分子生物学机制尚不清楚。因此,进一步明确牙齿发生的分子调控机制,通过分析牙齿形态发生关键基因,同时结合已知的研究成果,对于进一步诱导成体干细胞向成釉细胞分化,使其成为具有再生牙齿功能的细胞,将有重要的指导意义。目前,人类对胚胎发育时期的牙齿形态发生过程有了深入的了解,已有研究证明了人类牙齿发育各时期与胚胎发育各时期的比对关系,但是关于早期牙齿发育分化的时间却大相径庭。本课题利用组织形态学方法观察了在胚胎发育各时期上下颌各个牙齿的形态变化,同时通过免疫组织化学的方法,系统地检测了人胚胎发育各对应时期上下颌各个牙齿的发育分化标志物的表达。研究结果得出了一个精确的人类齿列的发育分化时间表,为现今教科书上关于牙齿发育分化时间的不统一提供了确切的理论依据,对教科书关于牙齿发育分化时间的编著有十分重要的意义,同时能够为未来人类牙齿发育研究提供理论基础。本研究参考分离纯化角朊细胞的方法,利用Dispase Ⅱ酶和TE酶两步法分离出牙胚上皮细胞,并建立牙上皮细胞培养体系对其进行传代培养,培养10天左右可传代一次,目前可传至第三代。应用免疫组化方法鉴定出所培养牙上皮细胞的上皮源性及胚胎源性,同时表明所分离的牙胚上皮原代细胞能够在体外继续表达组织特异性相关蛋白,该细胞可作为进一步研究牙齿发育机制的种子细胞。同时,本研究还探讨了人牙胚上皮细胞在体外诱导条件下的成牙潜能。利用嵌合体重组技术将人牙胚上皮细胞与小鼠E13.5磨牙牙胚间充质重组,移植肾囊膜下培养30天,结果可见嵌合体组织中具有完整牙齿的结构,包括明显拉长的成釉细胞层、牙本质、牙釉质、成牙本质细胞、牙髓复合体等。但是,也有部分嵌合体并未成牙,而是出现大量骨松质结构及囊性细胞团结构。研究发现,牙胚上皮细胞的成牙能力随着传代数的增加而降低。其中P1代细胞重组体的成牙率接近70%,P2代细胞重组体的成牙率为32%,P3代细胞重组体仅为10%。通过免疫组化和PCR进一步分析其原因,结果表明FGF8、PITX2等基因的表达随着传代次数的增多而减弱,这些基因在牙上皮细胞向成釉细胞分化中可能起到关键的作用。
【学位授予单位】：福建师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R783

【共引文献】