人根尖乳头干细胞和牙髓干细胞生物行为的比较研究

发布时间：2020-04-04 22:34

【摘要】： 目的： Gronthos S等发现牙髓组织中存在干细胞(dental pulp stem cells, DPSCs)。该细胞具有强增殖性、多向分化的潜能,在体外诱导可向成牙本质样细胞分化。同时,将DPSCs植入免疫缺陷鼠体内,发现有牙本质样基质形成；最近Sonoyama等研究发现在根尖乳头组织中存在干细胞,命名为根尖乳头干细胞(Stem cell from the apical papilla, SCAP),并证明这类细胞是与牙髓干细胞(dental pulp stem cells, DPSCs)不同类型的细胞。本实验目的是体外培养人根尖乳头细胞,经地塞米松矿化诱导,诱导矿化结节的形成及DSP和其他相关蛋白的表达,同时将肿瘤坏死因子α(TNF-α)对其进行干预,观察其对矿化过程及牙本质样细胞形成的影响,探讨炎症条件下根尖乳头细胞用于牙本质再生的可行性。同时与同一牙的牙髓细胞进行比较研究。方法：取18岁以下根尖未发育完成的健康阻生第三磨牙,用I型胶原酶和Dispase消化法进行根尖乳头细胞和牙髓细胞的培养,细胞达到汇合后进行传代,取第3-5代细胞用于实验。 1.取第3代细胞,将根尖乳头细胞、牙髓细胞以1×104个／mL的细胞悬液,分别接种于预先放置有细胞爬片的6孔板中,用免疫荧光方法鉴定细胞的间充质干细胞表面标记物STRO-1的表达。 2.将根尖乳头细胞、牙髓细胞分别以1×104个／mL接种于96孔板中,孵育4d后,采用MTT法检测细胞的增值状况。 3.将根尖乳头细胞、牙髓细胞分别以1×103个／mL接种于24孔板中,细胞大部分伸展贴壁后,加入矿化诱导液,孵育28d后,茜素红S染色法检测矿化结节形成情况,免疫组化法检测牙本质特异性蛋白DSP、矿化相关蛋白BSP表达情况。 4.将根尖乳头细胞、牙髓细胞分别以1×104个／mL接种于96孔板中,24h后将含有不同浓度TNF-α(5、10、50 ng／mL)的培养液加入,孵育4d后,MTT法检测其对细胞增殖活性的影响。 5.将根尖乳头细胞、牙髓细胞分别以1×103个／mL接种于24孔板中,细胞大部分伸展贴壁后,加入含有TNF-α的矿化诱导液,孵育28d后,茜素红S染色法检测矿化结节形成情况,免疫组化法检测牙本质特异性蛋白DSP、矿化相关蛋白BSP表达情况。结果： 1.原代培养的根尖乳头细胞呈梭形、多角形或纺锤形,形似成纤维细胞。牙髓细胞也似成纤维细胞,形状与根尖乳头细胞相似。免疫荧光技术表明,部分细胞STRO-1染色阳性。 2. MTT法结果表明,APCS较之DPCS具有更强的增值活性(P0.05)。 3.矿化液体外诱导,根尖乳头细胞和牙髓细胞叠层生长,形成肉眼可见的结节；茜素红S染色,有橘红色矿化结节形成；免疫组织化学染色技术显示,细胞诱导28d后,牙本质特异性蛋白DSP、矿化相关蛋白BSP阳性表达。 4.在10ng／mL和50ng／mL两个浓度时,TNF-α对根尖乳头细胞、牙髓细胞两种细胞的增值均具有促进作用(P0.05)。 5.用含有TNF-α的矿化液诱导,根尖乳头细胞和牙髓细胞在较早的时间便有肉眼可见的结节形成。茜素红S染色显示,有橘红色矿化结节形成；免疫组织化学染色技术显示,细胞在炎性因子的诱导28d后,DSP、BSP阳性表达。结论：体外培养的根尖乳头细胞形似成纤维细胞,STRO-1表达阳性；人根尖乳头较牙髓细胞具有较强的增殖活性,在炎性环境下也具有较强的增殖活性；根尖干乳头细胞在矿化液的诱导下向成牙本质样细胞分化；在炎性环境中,根尖乳干头细胞在矿化液的诱导下仍可向成牙本质样细胞分化。这一发现可能有利于根尖未发育完成的年轻恒牙发生牙髓坏死以及由此引起的根尖周炎经适当的治疗后牙根的继续发育。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R781

【参考文献】