大鼠颌骨及胫骨缺损再生修复中Hoxa2基因表达的比较研究

发布时间：2020-04-09 21:03

【摘要】： 因创伤、感染、肿瘤及先天性疾病等造成的颌骨缺损十分常见，深入探讨其再生修复的分子机制具有重要意义。与躯干四肢骨骼来源于中胚层间充质不同，颅颌面骨发生于颅神经嵴源外胚间充质，具有独特的膜内成骨机制，外胚间充质在成骨向分化中表现出不同的Hoxa2(homeobox a2，Hoxa2)基因活动特点，Hoxa2在颅颌面骨发生中未发现表达，但在躯干四肢骨中呈阳性表达，外源性Hoxa2可致下颌骨转型为舌骨。由此提示，成体颌骨与躯干四肢骨在组织再生修复机制方面可能存在差异。本实验在建立大鼠颌骨及胫骨缺损自限性愈合模型的基础上，采用组织形态学、免疫组织化学、RT-PCR等方法分别对其缺损区愈合骨痂中Hoxa2基因表达进行比较分析，初步探讨颌骨独特的再生修复机制。方法：取20只健康雄性SD大鼠，随机分成5组，每组4只。于大鼠左侧下颌骨及胫骨各制备约4mm大小的缺损，作为实验组，另一侧作为对照组。术后3天、7天、10天、14天、21天各处死一组动物，分别取出下颌骨及胫骨缺损区愈合骨痂用于组织学检测及RT-PCR。用10％多聚甲醛固定，10％EDTA脱钙，石蜡包埋后切片，进行常规HE染色及Hoxa2抗体免疫组织化学染色；提取缺损处骨痂及对照骨组织总RNA，以Hoxa2 mRNA第636-880碱基序列设计引物，β-actin为内参，采取RT-PCR扩增，检测Hoxa2 cDNA表达。结果：术后7天，组织学上见到骨缺损区新骨形成；术后14天，缺损区已基本被新骨代替，但与原正常骨仍有界限；术后21天与正常骨组织无明显界限。所有实验组及对照组胫骨组织均扩增出片段长度为245bp的目的基因条带，为Hoxa2 cDNA基因片段，半定量PCR分析发现实验组较对照组表达增强，统计学分析有显著性差异(p＜0.001)；所有实验组及对照组颌骨组织均未扩增出Hoxa2 cDNA目的基因条带。免疫组织化学分析对照组及实验组胫骨均可在细胞中发现Hoxa2分子表达阳性，实验组表达明显增强；对照组及实验组颌骨均未发现Hoxa2分子表达。结论：1)大鼠下颌骨及胫骨4mm大小的缺损能够自行骨性愈合。2) Hoxa2在颌骨再生修复中不表达，而在胫骨骨再生修复中表达增强，提示颌骨再生修复可能存在独特的分子调控机制。
【图文】：

大鼠,胫骨缺损,动物房,预防感染

南京医科大学硕士学位论文扰，严密缝合关闭创口(图1、2)。3)胫骨缺损的制备:将大鼠左腿外旋，在胫骨内侧备皮，消毒后，切开皮肤，皮下组织及肌层，暴露胫骨上端，在此制备同样大小的骨缺损，钦膜覆盖固定后，分层缝合。4)清醒后送返动物房(南京医科大学动物实验中心)，采取普通环境饲养，，术后连续三天以抗生素棉球擦拭伤口，预防感染。5)分别于术后第3天、7天、10天、14天、21天各处死4只大鼠，处死后解剖出手术侧及对照侧下领骨及胫骨。四、标本处理进行大体标本观察后用10%中性多聚甲醛固定24小时，然后用10%EDTA液脱钙5周

新骨,软骨细胞,成骨细胞分化,炎症细胞

图2术后第3天领骨标本Fig.1thesamPleofjawboneonday3PostoPeration2一l，exPerimentalgrouP:2一2，eontrolgrouP三、组织学观察术后3天见缺损中心充满大量血细胞，边缘可见极少的未成熟新骨形成，成纤维细胞增生，炎症细胞已有所减少(图3、4);术后7天边缘新骨增多，高倍镜下可见越靠近缺损边缘，新生骨的成熟程度越高，成骨细胞分化明显，但数量较少(图5、6);术后10天见缺损中央血管丰富，边缘新骨增多，可在胫骨边缘见软骨细胞及成层排列的成骨细胞，而领骨中未见软骨细胞(图7、8);术后14天缺损
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R782;R683

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