黄芪多糖对牙龈成纤维细胞在创伤修复中生物学行为的影响

发布时间：2020-05-13 17:57

【摘要】：实验目的:本文就黄芪多糖(Astragalus Polysaccharides,APS)对人牙龈成纤维细胞(Human Gingival Fibroblast,HGF)生物活性作用进行讨论,探讨其对成纤维细胞增殖、迁移及胶原分泌的影响,并与表皮生长因子(Epidermal Growth Factor,EGF)进行比较,为如何促进牙龈软组织增量及加速创口愈合开辟一种中西医结合的新研究方法。实验方法:1.取临床患者种植手术环切下的的牙龈组织,提取原代牙龈成纤维细胞,传代培养,细胞冻存及复苏。2.采取免疫组化及免疫荧光方法鉴定细胞来源。3.绘制牙龈成纤维细胞生长曲线,观察其生长周期规律。4.采用CCK-8方法分别于24h、48h、72h时检测不同浓度黄芪多糖对牙龈成纤维细胞增殖能力的影响。(黄芪多糖浓度分组依次为A组0μg/ml,B组12.5μg/ml,C组25μg/ml,D组50μg/ml,E组100μg/ml,F组200μg/ml,G组400μg/ml)。5.采用考马斯亮蓝方法于72h时检测不同浓度黄芪多糖对牙龈成纤维细胞分泌总蛋白量的影响。6.采用CCK-8方法分别于24h、48h、72h时检测不同浓度表皮生长因子对牙龈成纤维细胞增殖能力的影响。7.划痕实验分别于24h、48h、72h时检测黄芪多糖和表皮生长因子对牙龈成纤维细胞向创口迁移移行愈合率的影响。8.黄芪多糖和表皮生长因子处理成纤维细胞24h、48h、72h时,ELISA方法检测Ⅰ胶原的表达。9.实验结果采用SPSS17.0软件统计,单因素方差分析法分析。实验结果:1.采用组织块培养法提取原代牙龈成纤维细胞,细胞呈长梭形,角形或星形,细胞核呈圆形或卵圆形,位于细胞中央,细胞状态良好。2.免疫组化及免疫荧光染色结果表明抗波形蛋白抗体呈阳性表达,抗角蛋白抗体呈阴性表达。证明提取细胞为间充质来源细胞,无上皮源性细胞混杂。3.绘制牙龈成纤维细胞生长曲线,细胞生长曲线大致呈“S”型,第1-2天生长缓慢,第3-5天呈对数生长,第6-7天趋于平稳,符合一般细胞增殖规律。4.CCK-8结果表明,实验组和对照组均能促进HGF增殖,B组与对照组比较无统计学差异(P0.05),C组和D组在培养48h和72h时促进细胞增殖能力高于对照组(P0.05)。E组、F组和G组24h、48h和72h促进细胞增殖能力高于对照组(P0.05)。72h时F组促进细胞增殖能力最强(P0.001),G组促进细胞增殖能力较F组略下降。5.不同浓度黄芪多糖处理HGF72h后,B组总蛋白表达量与对照组比较无差异(P0.05),C组-G组细胞总蛋白表达量高于对照组(P0.05),F组总蛋白表达量最高。6.与对照组比较,EGF浓度为40 ng/ml和80 ng/ml时处理HGF48h和72h后,明显促进细胞增殖(P0.05),80 ng/ml的EGF在48h时促进细胞增殖效果最显著(P0.001)。7.划痕实验结果表明,24h时各组细胞移行愈合率无明显差异(P0.05),48h时黄芪多糖组和EGF组移行愈合率高于α-MEM组(P0.01)。72h时见多数细胞裂解,无法统计结果。8.Elisa检测结果表明,24h、48h和72h时黄芪多糖组细胞上清液中Ⅰ型胶原表达高于对照组(P0.05),48h和72h时EGF组Ⅰ型胶原表达高于对照组(P0.01)。结论:黄芪多糖可以促进牙龈成纤维细胞的增殖、总蛋白的分泌及Ⅰ型胶原的表达,并趋化牙龈成纤维细胞向创口处迁移,加速创口愈合。
【图文】：

牙龈成纤维细胞,放大倍率,细胞形态,光学显微镜

图 3.1 光学显微镜下原代牙龈成纤维细胞放大不同倍数的细胞形态A．放大倍率 4× B.放大倍率 10× C.放大倍率 20× D.放大倍率 40×3.2 细胞鉴定3.2.1 免疫组织化学染色

放大倍率,细胞角蛋白,波形蛋白,阴性

图 3.2.1 光学显微镜下观察细胞角蛋白染色呈阴性 A.放大倍率 10× B.放大倍率 20×细胞波形蛋白染色呈阳性 C．放大倍率 10× D.放大倍率 20×3.2.2 免疫荧光染色
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R78

【参考文献】