防龋用转基因番茄和生菜中目的基因遗传传递的初步分析

发布时间：2020-05-17 20:14

【摘要】：目的：在获得含目的基因pacA-ctxB、pacP-ctxB的转基因番茄T0、T1、T2、T3代种子和转基因生菜T0代种子的基础上,应用PCR技术、GUS染色技术对不同生长时期的转基因番茄后代植株进行跟踪检测,初步探索目的基因pacA-ctxB、pacP-ctxB在转基因番茄后代植株中的遗传稳定性,并对报告基因gus和目的基因pacA-ctxB、pacP-ctxB的连锁遗传进行初步分析,鉴定和筛选含目的基因的T1代转基因生菜植株。 方法：本试验包括三部分 第一部分：防龋用转基因番茄后代植株中外源目的基因稳定性检测 提取转pacA-ctxB、pacP-ctxB基因番茄T1、T2、T3、T4代植株幼苗期、开花期、果实成熟期总DNA,利用PCR技术检测和鉴定含有外源目的基因pacA-ctxB、pacP-ctxB的转基因番茄植株,每代种植11株植株。 第二部分：防龋用转基因番茄后代植株中报告基因gus和目的基因的连锁遗传 1、采集转基因番茄和非转基因番茄植株幼根组织,通过组织化学染色定位法检测转pacA-ctxB、pacP-ctxB基因番茄后代群体T1、T2、T3、T4代植株中的gus基因。 2、采集转基因番茄和非转基因番茄植株叶片提取总DNA进行PCR检测,筛选含外源目的基因pacA-ctxB、pacP-ctxB的转基因番茄植株。 第三部分：防龋用T1代转基因生菜中目的基因pacA-ctxB、pacP-ctxB的检测 提取转pacA-ctxB、pacP-ctxB基因生菜T1代植株总DNA,PCR法鉴定转pacA-ctxB、pacP-ctxB基因生菜T1代植株。 结果：①提取含pacA-ctxB的T1、T2、T3、T4代转基因番茄总DNA进行PCR扩增,幼苗期每代转基因番茄植株分别有9、9、8、9株得到大小约为450bp的条带,与阳性对照一致,阳性检测率分别为81.8%、81.8%、72.7%、81.8%,开花期和果实成熟期检测结果与幼苗期一致。②含pacP-ctxB的T1、T2、T3、T4代转基因番茄幼苗期每代植株分别有9、8、8、7株得到大小约为506bp的条带,与阳性对照一致,阳性检测率分别为81.8%、72.7%、72.7%、63.6%,开花期和果实成熟期检测结果与幼苗期一致。③转pacA-ctxB基因番茄T1、T2、T3、T4代植株中分别有9、9、8、9株GUS染色为阳性,gus基因阳性株数与pacA-ctxB基因阳性株数完全一致,吻合率为100%,转pacP-ctxB基因番茄T1、T2、T3、T4植株中分别有9、8、8、7株GUS染色为阳性,gus基因阳性株数与pacP-ctxB基因阳性株数完全一致,吻合率为100%。④提取10株转pacA-ctxB基因生菜植株总DNA经PCR扩增、电泳后,有6株见约450bp扩增条带,与阳性对照一致；10株转pacP-ctxB基因生菜植株总DNA经PCR扩增、电泳后,有6株见约506bp扩增条带,与阳性对照一致,其余植株和正常对照植株未有扩增条带。 结论：①外源基因pacA-ctxB、pacP-ctxB整合进番茄基因组中,并且能够在转基因番茄的后代中稳定的遗传。②报告基因gus和目的基因pacA-ctxB、pacP-ctxB在T-DNA中紧密连锁遗传,报告基因gus可用于研究pacA-ctxB、pacP-ctxB基因的遗传。③PCR法对转基因生菜植株进行检测,获得了含pacA-ctxB、pacP-ctxB基因的T1代转基因生菜植株。
【图文】：

图1.pEAC10和pEPC10的酶切结果Fig.1ThedigestionresultsofPEAC10andPEPC10:DNAhindlllMarkerZ:pEAclo总J贡粒3、4:pEACIO双酶切:DNADLZ000Marker6、7:pEPe一。双酶叨8:pEpCIO总质粒

日的从因j遗传传递的初步分析3.3转基因番茄植株的获得转基因植株的培育过程(见图2)，将转基因番茄T。、TI、TZ、T:代种子在仁壤中培育发芽(图ZA)，发芽至芽长scm后移栽单独生长2周后再移至大田(图ZB)，大约在种植30天左丫。)l:始开花(图ZC)，在90天左右番茄陆续成熟(图ZD)。图2转基因番茄的培育 FigZTheeultivationofTransgenietomatosA育苗期C少千花期B幼曲期D成熟期3.4转基因番茄后代植株目的基因PCR检测结果3.4.1转p““一c坎B基因番茄植株幼苗期、开花期、果实成熟期目的基因PcR检测结果 3.4.1.1提取T}、T:、T:、T;代转产孤」-C众召基因番茄幼苗期植株时‘少}‘总DNA进行PCR扩增，分别有9、9、8、9株得到大小约为450bp的特异性条带，与阳性对照一致。TI代植株第8、9株未检测到LI的条带，，T:代第6、9株未检测到目的条带
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R781.1

【参考文献】

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1 闫喜中;张锐;孟志刚;孙国清;周涛;郭三堆;;转基因抗虫棉Bt基因与npt Ⅱ基因的遗传与表达[J];华北农学报;2008年06期

2 曲岷;宋健;白吉刚;王秀娟;;植物转基因及其在农业中的应用[J];海洋湖沼通报;2008年04期

3 夏兰芹,郭三堆;Bt杀虫基因在转基因双价抗虫棉中的整合与遗传稳定性[J];科学通报;2001年07期

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本文编号：2669118