TGFβ1和TGFβ3在维甲酸诱导腭裂以及正常小鼠腭部的表达

发布时间：2020-05-21 21:23

【摘要】： 目的:腭裂(cleft of palate)是一种常见的先天发育畸形,在颅颌面畸形中占绝大部分。它的发生给患者及家属的生活和心理带来了较大的影响。目前,已有学者就腭裂发生机制做出了较多的基础及临床方面的研究,并取得了一定的成就。但它是一种多基因遗传病,目前其发病机制仍不甚明确。腭裂发病机制的研究可以为腭裂的预防和产前诊断提供广阔的前景。 维甲酸(retinoic acid ,RA)在生物体的胚胎发育、器官形成、细胞分化和维持正常的生理稳态中起重要作用。在胚胎发育过程中,内源性维甲酸与正常的生长发育密切相关。过量的维甲酸有明显的毒副作用,可以使基因错误表达从而导致胚胎的异常发育,诱导组织器官畸形形成。维甲酸信号的功能最终是通过基因转录调控来实现的,如生长因子、细胞因子及其受体、激素、转录因子、激酶及磷酸酶、细胞内酶和效应因子等,都受维甲酸的调节。近年来国外学者对维甲酸( retinoic acid ,RA)调控基因表达与其诱导腭裂形成的关系进行了研究,但RA诱导腭裂畸形的机制仍不明确。 转化生长因子β超家族(transforming growth factorβ,TGFβ)是一类具有多种生物学活性的细胞因子,在多方面参与胚胎发育,它对不同类型的细胞既可以促进其增殖、生长分化,也可以抑制细胞的生长,是一种细胞生长的双向调节因子。近来有学者通过先提取样本的DNA ,选择特定基因标记引物进行PCR扩增,然后检测PCR扩增产物。筛选出TGFβ可能为腭裂发生的易感基因。因此,本实验预通过维甲酸建立C57BL/6J系小鼠腭裂模型,在此基础上通过免疫组化来检测TGFβ1和TGFβ3在维甲酸诱导腭裂以及正常C57BL/6J系小鼠腭部表达的时空变化,为进一步研究做准备。 方法:选10周龄左右,雄性体重在25克以上,雌性体重在20克以上的C57BL/6J小鼠。于第一日晚5时按雌雄比例2:1合笼,次日早8点检查阴栓情况,阳性者记为妊娠0天(gestation 0day,GD0)。共得孕鼠(10)只,将所得孕鼠随机分成两组:第一组为实验组,共(5)只;第二对照组为组,共(5)只。实验组孕鼠在GD10上午10时按照0.01ml/g体重灌注10mg/ml的维甲酸植物油溶液,对照组小鼠按0.01ml/g体重灌注植物油。实验组与对照组分别于GD14、GD15、GD16 3个时间点处死实验小鼠取出胚胎。取胚胎鼠头固定、包埋后切片,进行免疫组化检测TGFβ1和TGFβ3在各时间点于小鼠腭部的表达情况。由此,得出TGFβ1和TGFβ3在维甲酸诱导腭裂小鼠以及正常小鼠腭突中的表达情况。 结果: 1维甲酸给药组与对照组间充质中TGFβ3的表达随着胚胎的发育都有所降低,GD14、GD16维甲酸给药组与对照组间充质中TGFβ3的表达相同, GD15给药组TGFβ3的表达偏高;给药组与对照组早期(GD14,GD15) TGFβ1的表达较为一致,随着胚胎的发育有所升高,然而在发育后期(GD16)TGFβ1在实验组腭突中的表达较对照组偏高。 2维甲酸给药组中嵴上皮中的TGFβ3一直处于高表达状态,而对照组中嵴上皮中TGFβ3的表达随胚胎的发育逐渐降低;给药组中嵴上皮中TGFβ1的表达随胚胎的发育明显升高,对照组中嵴上皮中TGFβ1的表达则是先升高而后降低。 3维甲酸给药组与对照组鼻腔侧上皮中TGFβ3的表达在GD14相同,GD15给药组比对照组高,GD16则对照组稍高;维甲酸给药组与对照组鼻腔侧上皮中TGFβ1的表达在GD14时相同,GD15给药组比对照组偏低,GD16实验组TGFβ1表达明显低于对照组。 结论: 1、实验组TGFβ3在发育早期(GD14,GD15)间充质中的表达偏高,TGFβ1的表达偏低,说明TGFβ1和TGFβ3可能通过抑制间充质细胞的增殖,影响腭突的上抬,诱发腭裂。 2、实验组中嵴上皮中TGFβ3始终处于高水平表达,可能使中嵴上皮向口腔侧上皮异常分化;晚期(GD16)TGFβ1的高水平表达,也可能促进中嵴上皮的异常分化。可推测TGFβ1和TGFβ3可能诱导中嵴上皮的异常分化,诱发腭裂。 3、GD15时,实验组鼻腔侧上皮TGFβ3表达偏高,TGFβ1的表达减弱,可能诱导鼻腔侧上皮异常分化。可推测TGFβ1和TGFβ3可能使鼻腔侧上皮异常分化,不能与鼻中隔接触融合,诱发腭裂。
【图文】：

图 C\D\E 分别为实验组 GD14\GD15 \GD16 ×100 TGFβ1 表达情况（箭头示为口腔侧上皮）。图 F\G\H 分别为对照组 GD14\GD15 \GD16 ×100 TGFβ1 表达情况（箭头示为口腔侧上皮）
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R782.2

【参考文献】

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本文编号：2674924