纳秒脉冲电场联合吉西他滨对人舌鳞癌细胞株Cal-27细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响

发布时间：2020-05-27 00:37

【摘要】：目的：通过纳秒脉冲电场联合低浓度吉西他滨对人舌鳞癌细胞株Cal-27细胞增殖、凋亡及侵袭能力的研究,探讨纳秒脉冲电场联合化疗药物吉西他滨对人舌鳞癌细胞的最佳联合治疗方案及其抗肿瘤效应,旨在为纳秒脉冲电场在头颈部肿瘤治疗中的基础研究及临床应用提供一定的实验基础和理论依据。方法：本实验通过体外培养人舌鳞癌细胞株Cal-27细胞进行细胞增殖、凋亡和侵袭实验研究。实验分为四组：空白对照组、吉西他滨组、纳秒脉冲电场组、吉西他滨联合纳秒脉冲电场组。MTT法检测在不同作用时间(24h、48h、72h)和不同给药浓度(0.01μg/ml、0.1μ g/ml、1.0μ g/ml、10μ g/ml、100μ g/ml)吉西他滨对人舌鳞癌细胞株Cal-27细胞增殖抑制作用以及不同场强的纳秒脉冲电场(0,10,30,60kV/cm)联合低浓度吉西他滨对Cal-27细胞增殖抑制的影响；平板克隆形成实验检测纳秒脉冲电场联合吉西他滨对Cal-27单细胞克隆形成能力的影响；Annexin V-FITC/PI细胞凋亡双染检测纳秒脉冲电场联合吉西他滨对人舌鳞癌Cal-27细胞凋亡的影响；透射电子显微镜检测联合作用前后引起的Cal-27细胞凋亡形态学变化；Trans-well侵袭实验和划痕实验检测纳秒脉冲电场联合吉西他滨对人舌鳞癌Cal-27细胞侵袭、迁移能力的影响。结果： 1)MTT法检测结果：吉西他滨对人舌鳞癌细胞Cal-27细胞的增殖抑制能力与药物作用时间、药物作用浓度呈时间-剂量依赖性,随着药物浓度的逐渐升高和作用时间的逐渐延长,吉西他滨对Cal-27细胞的增殖抑制作用也逐渐变强。0.01μ g/ml的吉西他滨组在24h、48h、72h的细胞抑制率分别为7%,10%,38%,均未超过50%的细胞抑制率。选用抑制率较低的0.01μ g/ml的药物浓度联合不同场强的纳秒脉冲电场处理Cal-27细胞,结果显示细胞的增殖抑制率与纳秒脉冲电场的作用场强和细胞培养时间成依赖关系。在60kV/cm的纳秒脉冲电场联合0.01μ g/ml的吉西他滨作用下, Cal-27细胞在24h、48h、72h的细胞增殖抑制率分别为79%、85%、92%,显著高于吉西他滨组和纳秒脉冲电场组的单独作用效果。结果提示纳秒脉冲电场联合0.01μ g/ml吉西他滨对Cal-27细胞的增殖抑制能力有显著的协同作用(SQ1;P0.01)。 2)平板克隆形成实验检测结果：0.01μ g/ml吉西他滨联合纳秒脉冲电场(10,30,60kV/cm)对人舌鳞癌细胞株Cal-27细胞的单细胞克隆形成能力有显著的抑制作用(SO1；P0.01)。 3)Annexin V-FITC/PI细胞凋亡双染检测结果：0.01μ g/ml吉西他滨联合纳秒脉冲电场(10,30,60kV/cm)对人舌鳞癌细胞株Cal-27细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率均有明显的协同作用(SQ1；P0.01),同一作用时间下,随着纳秒脉冲电场场强的提升,细胞凋亡率逐渐增大。提示纳秒脉冲电场联合吉西他滨诱导舌鳞癌细胞凋亡的作用具有场强依赖性。 4)透射电子显微镜结果：0.01μ g/ml吉西他滨联合纳秒脉冲电场(10,30,60kV/cm)能显著诱导人舌鳞癌细胞株Cal-27细胞出现细胞核皱缩、染色质浓缩、线粒体空泡样变性、凋亡小体等典型的凋亡形态学变化。 5)细胞侵袭实验结果：0.01μ g/ml吉西他滨联合纳秒脉冲电场(10,30,60kV/cm)对人舌鳞癌细胞株Cal-27细胞的侵袭能力有明显的抑制作用,透过基底膜的细胞数量明显减少,侵袭抑制率明显升高,组间差异有统计学意义(SQ1;P0.01)。 6)细胞划痕实验结果：0.01μ g/ml吉西他滨联合纳秒脉冲电场(10,30,60kV/cm)对人舌鳞癌细胞株Cal-27细胞的迁移能力有明显的抑制作用,细胞划痕的愈合能力比未处理组细胞显著减弱。结论： 1)吉西他滨能显著抑制人舌鳞癌Cal-27细胞的增殖,其增殖抑制作用呈时间-剂量依赖性。 2)纳秒脉冲电场联合0.01μ g/ml的吉西他滨对人舌鳞癌Cal-27细胞的增殖抑制能力、克隆形成能力和诱导凋亡能力有显著的协同作用。 3)纳秒脉冲电场联合0.01μ g/ml的吉西他滨显著抑制了人舌鳞癌Cal-27细胞的体外侵袭迁移能力。
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R739.8

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