PTEN基因在唾液腺腺样囊性癌中的表达研究

发布时间：2020-06-03 03:31

【摘要】：背景: 肿瘤是指在各种致癌因素的影响下,造成细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控,导致细胞克隆性异常增生而形成的。癌症作为其中的一大类,是目前造成死亡的主要病因之一,其具有局部浸润及远处转移等重要特性,是致人死亡的最主要原因。 抑癌基因(tumor suppressor gene)是指一大类可以抑制细胞分裂及抑制癌变作用的基因,即在机体内对正常细胞增殖起负调节作用的基因,当抑癌基因缺失、失活或异常表达时,往往会促使细胞失控而呈恶性生长。原癌基因是指具有诱导它所在的细胞癌变的基因,是人或动物细胞内控制细胞生长的固有基因,现认为抑癌基因的负性表达或原癌基因的显性表达可能是引起细胞异常性增殖或癌变的主要调节机制,因此,抑癌基因的异常表达与原癌基因的表达,可能是肿瘤发生、发展的主要原因。 PTEN(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)基因作为一个具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因,定位于染色体10q23,在多种肿瘤的研究中表明,该区段常出现的杂合子丢失、无义突变、错义突变等可能是造成肿瘤发生、发展的原因,如:胶质瘤、甲状腺癌、乳腺癌、口腔鳞状细胞癌等。在已有研究表明,PTEN基因在正常组织中呈现高表达,在肿瘤组织中出现低表达或表达缺失,所以,PTEN可能是肿瘤发生、发展机制中重要的因素之一。目前,对唾液腺腺样囊性癌的研究较少,因此,进一步研究唾液腺腺样囊性癌中是否存在PTEN基因的表达异常、是否存在与其他肿瘤相似的低表达、PTEN蛋白的表达是否与PTEN基因的转录相关,就显得很有必要。 目的: 本实验应用RT-PCR、western bloting法,研究唾液腺正常组织和唾液腺腺样囊性癌组织中PTEN基因及蛋白的表达差异;了解PTEN基因是否与唾液腺腺样囊性癌的发生有关及PTEN蛋白的表达与PTEN基因RNA转录是否相关,为了解唾液腺组织肿瘤的发生与抑癌基因PTEN基因的相关性提供一定的实验依据,以及为唾液腺肿瘤的实验室诊断提供相应的实验依据和理论基础。 材料与方法: 1、采集病理诊断明确为唾液腺腺样囊性癌患者的唾液腺腺样囊性癌组织及其相应的正常组织,按RNA提取说明书提取总RNA,行反转录PCR,PCR扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳,用Bio-Rad凝胶图像成像仪观察结果,分析唾液腺正常组织和唾液腺腺样囊性癌组织中PTEN RNA的表达。 2、采集病理诊断明确为唾液腺腺样囊性癌患者的唾液腺腺样囊性癌组织及其相应的正常组织,按蛋白质提取Western及IP细胞裂解液说明书提取总蛋白,BCA法测定蛋白浓度,然后,用western免疫印迹(western bolting WB)分析PTEN蛋白表达,经荧光显影,X片成像,运用Bio-Rad凝胶图像成像仪观察结果,分析唾液腺正常组织和唾液腺腺样囊性癌组织中PTEN蛋白的表达。 结果: 1、在唾液腺腺样囊性癌组织中PTEN RNA的表达呈低表达,在正常唾液腺组织中PTEN RNA的表达呈高表达状态。根据Bio-Rad凝胶图像成像仪对电泳图片的灰度值进行定量测定,采用SPSS13.0统计软件,利用t检验进行统计学分析:唾液腺腺样囊性癌组织中PTEN RNA的表达较正常唾液腺组织明显降低,并且两者的差异具有统计学意义(P0.05)。 2、在唾液腺腺样囊性癌组织中PTEN蛋白的表达呈低表达,在正常唾液腺组织中PTEN蛋白的表达呈高表达状态。根据Bio-Rad凝胶图像成像仪对成像的X线片的灰度值进行定量测定,采用SPSS13.0统计软件,利用t检验进行统计学分析:唾液腺腺样囊性癌组织中PTEN蛋白的表达较正常唾液腺组织明显降低,并且两者的差异具有统计学意义(P0.05),同时,PTEN蛋白在两者中的表达与PTEN基因的转录水平具有一定的相关性。 结论: PTEN基因在唾液腺腺样囊性癌和正常唾液腺中都存在表达,在正常唾液腺组织中PTEN基因的表达呈高表达状态,在唾液腺腺样囊性癌中PTEN基因的表达明显降低,PTEN基因在两者中的表达水平的差异在一定程度上可以反映出PTEN基因在唾液腺腺样囊性癌的发生过程中起到一定的作用。PTEN基因作为具有多特异性的磷酸酶活性的抑癌基因,在肿瘤的发生、发展机制中的起到重要的作用,有可能作为早期诊断、监控唾液腺腺样囊性癌的标记物,以期早期诊断,提高治疗效率,提高患者的生存质量,为患者提供更好的服务。
【图文】：

图 2： PTEN 基因 3D 结构图Fig 2：The 3D structure of PTENPTEN 基因突变常出现在人类肿瘤和具有癌变倾向的遗传性综合症，，如 胃乳腺癌、神经胶质瘤、Bannayan-zonana 综合症、Cowden 病等，抑癌基因 PTEN控细胞周期、诱导细胞凋亡、体内免疫功能的调节、胚胎发育及细胞移行、、生长等生理活动中具有重要的作用[15-18]。1、PTEN 基因阻滞细胞周期，诱导细胞凋亡 PTEN 基因是具有双特异性酶活性的抑癌基因，能激活 PI3K，使细胞膜上的 PIP3降解、脱磷酸化，保持的低水平，从而阻断 PI3K/Akt 生长因子信号转导通路，实现阻滞细胞周期，细胞凋亡的功能。当 PTEN 突变或缺失导致 PIP3脱磷酸化降低，造成 PIP3时 Akt 可磷酸化激活，从而拮抗细胞凋亡，同时造成细胞生长周期异常而表非正常性增殖。

图 1-1 PTEN RNA 在正常唾液腺组织和唾液腺腺样囊性癌组织的表达Fig. 1-1 The expression of PTEN RNA in Normal salivary gland and salivary glandadenoid cystic carcinomaM：DNA 标准；0：正常唾液腺组织； 1：唾液腺样囊性癌组织2.2 定量积分分析表 1-1 PTEN RNA 在正常唾液腺组织和唾液腺腺样囊性癌组织表达的灰度值分析情况表Table 1-1 Quantitative analysis of PTEN RNA expression between in Normal salivary glandand salivary gland adenoid cystic carcinoma正常组织中 PTEN RNA 的灰度值 腺样囊性癌中 PTEN RNA 的灰度值PTEN 64727.00±0.0564583.88±0.1464573.28±0.2664644.94±0.3041019.95±0.6232483.46±0.1540462.31±0.3441028.0.19β-actin 64703.7±0.62868.61±064453.2564126.7364727.0061111.9663304.5164682.
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R739.8

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本文编号：2694224