负性共刺激因子PD-1、PD-L1和CMTM6在口腔鳞癌中的表达及临床意义

发布时间：2020-06-11 11:47

【摘要】：背景口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)是口腔颌面部恶性肿瘤中最常见的一类疾病,易发生侵袭、转移,对患者的生活质量及生命造成极大的危害。目前,尽管临床上OSCC有多种治疗方法,但晚期肿瘤患者的疗效仍不理想,近年来研究报道,免疫治疗为恶性肿瘤的患者带来希望,可有效改善患者的预后。其中,程序性死亡受体1(programmed death 1,PD-1)及其配体(programmed cell death-ligand 1,PD-L1)这一对负性共刺激分子是影响T细胞功能的重要免疫调节因子,在肿瘤的免疫逃逸过程中发挥重要作用。目前,临床上针对免疫检验点PD-1/PD-L1单克隆抗体的治疗在多种肿瘤治疗中已取得突破性进展。然而对于某些晚期肿瘤来讲因其负荷较大,患者机体内微环境改变及免疫耐受的产生,单一的免疫治疗并不敏感,因此有必要采用联合免疫治疗的方法来提高疗效。最新研究报道,趋化素样因子超家族6(CMTM6)与PD-L1共同定位于质膜和循环核内体上,作为PD-L1的调控分子,可增强PD-L1的表达,提高肿瘤抑制免疫应答的能力。CMTM6有效地调控PD-L1的表达,控制CMTM6能显著减轻肿瘤特异性T细胞活性的抑制,因此CMTM6有望成为肿瘤联合免疫治疗的新靶点。目前,关于PD-1/PD-L1和CMTM6在OSCC组织中的表达,以及CMTM6与PD-1/PD-L1信号通路的国内外文献鲜见报道。本文旨在研究PD-1、PD-L1、CMTM6在OSCC组织中的表达水平及生物学意义,为OSCC的免疫治疗提供一定的理论基础。目的本文通过研究PD-1、PD-L1和CMTM6在OSCC组织和正常口腔黏膜组织中的表达,分析与OSCC患者临床病理参数之间的关系,以及PD-1、PD-L1和CMTM6三者之间的相关性,以期探索OSCC的致病机制,为OSCC的免疫治疗提供理论基础。方法本实验选取郑州大学附属肿瘤医院病理科存档的满足实验条件的石蜡包埋组织(FFPE)66例(OSCC组织44例,正常口腔黏膜组织22例),分别采用实时荧光定量PCR技术和免疫组织化学方法检测PD-1、PD-L1、CMTM6在OSCC组织和正常口腔黏膜组织中mRNA和蛋白的表达。mRNA表达采用2~(-△△Ct)方法计算其相对表达量,蛋白表达采用半定量评判标准。实验结果采用SPSS19.0软件进行统计学分析,定量资料的组间比较采用Wilcoxon秩和检验,定性资料的组间比较采用χ~2检验或Fisher确切概率法,采用Spearman秩相关进行相关性分析。P0.05表示差异有统计学意义。结果1.PD-1 mRNA在OSCC组织中和正常口腔黏膜组织中的相对表达量分别为0.0008601±0.0000020、0.0000199±0.0000000;PD-L1 mRNA在OSCC组织中和正常口腔黏膜组织中的相对表达量分别为0.0099626±0.0003928、0.0008427±0.0000024;CMTM6 mRNA在OSCC组织中和正常口腔黏膜组织中的相对表达量分别为0.0180891±0.00100000、0.0063536±0.00021324;三者差异均具有统计学意义(P=0.041,P=0.035,P=0.0330.05)。2.PD-1蛋白表达于淋巴细胞的胞浆和胞膜上,PD-L1、CMTM6蛋白均表达于肿瘤细胞的胞浆及细胞膜上。PD-1、PD-L1、CMTM6蛋白在OSCC组织中的阳性表达率分别为66%、55%、23%,在正常口腔黏膜组织中分别为23%、25%、0%,差异均具有统计学意义(P=0.014,P=0.002,P=0.0100.05)。3.OSCC组织中PD-1、PD-L1、CMTM6蛋白表达阳性率与患者临床病理参数分析:PD-L1蛋白在患者TNM分期为I~II期和III~IV期的OSCC组织中阳性率分别为53.57%和87.50%,其差异具有统计学意义(P=0.0220.05);PD-L1蛋白在患者淋巴结有转移和无转移的OSCC组织中阳性率分别为87.50%和53.57%,其差异具有统计学意义(P=0.0220.05)。PD-1和CMTM6蛋白的阳性表达率与患者性别、年龄、烟酒习惯、肿瘤大小、病理分级、淋巴结转移和临床分期等临床病理特征均无相关性(P0.05)。4.OSCC组织中CMTM6和PD-1/PD-L1之间相关性分析,Spearman检验结果示:CMTM6与PD-L1在蛋白和mRNA水平表达上均呈正相关(r_s=0.510,P=0.0000.05;r_s=0.474,P=0.0030.05)。CMTM6与PD-1之间无明显相关性(P0.05)。5.OSCC组织中PD-1、PD-L1、CMTM6 mRNA与蛋白表达相关性分析,Spearman检验结果示:PD-1 mRNA表达与蛋白表达、PD-L1 mRNA表达与蛋白表达、CMTM6 mRNA表达与蛋白表达均呈正相关(r_s=0.756,P=0.0300.05;r_s=0.841,P=0.0000.05;r_s=00629,P=0.0280.05)。结论1.负性共刺激因子PD-1、PD-L1和CMTM6均参与OSCC的免疫逃逸机制,与OSCC的发生发展密切相关。2.PD-L1的表达水平与OSCC患者疾病的严重程度及预后有关。3.OSCC微环境中CMTM6可能与PD-1/PD-L1信号通路的调控具有协同作用,CMTM6可能通过激活或加强PD-1/PD-L1信号通路,发挥免疫抑制的作用。4.CMTM6可成为OSCC的免疫治疗新靶点,与PD-1/PD-L1联合免疫治疗有望提高临床疗效。
【图文】：

熔解曲线,熔解温度,峰形,基线

3 实验结果3.1 qRT-PCR 扩增结果扩增曲线基线平稳，呈平滑 S 型；熔解曲线峰形单一、锐利，熔解温度均一；PD-1、PD-L1 和 CMTM6 扩增曲线及熔解曲线结果（见图 3-1、3-2、3-3）：

熔解曲线,熔解温度,峰形,基线

3 实验结果3.1 qRT-PCR 扩增结果扩增曲线基线平稳，呈平滑 S 型；熔解曲线峰形单一、锐利，，熔解温度均一；PD-1、PD-L1 和 CMTM6 扩增曲线及熔解曲线结果（见图 3-1、3-2、3-3）：图 3-1 PD-1 扩增曲线及熔解曲线
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.8

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