影响富血小板血浆活性的相关因素分析

发布时间：2020-06-11 15:16

【摘要】： 目的:富血小板血浆(platelet-rich plasma, PRP)的活性与血小板的浓度和活性密切相关。本课题通过研究不同离心、储存方法对血小板计数及活性的影响,同时分析不同激活剂对PRP凝固及释放生长因子的影响,探讨PRP的最佳制备、储存方法及激活剂的使用,为动物实验和临床应用研究提供理论和实验依据。 方法:采用四种离心方法(方法一:一次离心力200g,二次离心力200g;方法二:一次离心力200g,二次离心力1200g;方法三:一次离心力1200g,二次离心力200g;方法四:一次离心力1200g,二次离心力1200g)制备PRP,通过血小板计数和ELISA法分别检测PRP中血小板浓度和血浆P选择素浓度。选择22℃和-80℃储存制备的PRP,通过血小板计数和ELISA法检测不同温度储存24h后PRP中血小板浓度和血浆P选择素浓度。血浆P选择素浓度用相应血小板计数进行归一化。分别以壳聚糖、凝血酶受体激动剂肽6(TRAP)和牛凝血酶作为激活剂,测定富血小板凝胶(platelet-rich gel, PRG)的体外凝固时间和血块凝缩率,并通过ELISA法测定释放的生长因子TGF-β1和PDGF的浓度。数据采用SPSS 11.0软件,行单因素方差分析。 结果:不同离心方法制备的PRP中,血小板计数明显高于全血,分别是全血血小板计数的4.21,4.94,4.12,4.72倍。其中方法二的血小板计数最高,与方法一、三之间的差异有显著性意义(P0.01)。PRP中归一化血浆P选择素浓度,方法二和四之间无显著性差异(P0.05),但明显低于方法一和三(P0.01)。采用方法二制备的新鲜PRP以及经过22℃及-80℃储存24h后PRP的血小板计数无显著性差异(P0.05)。归一化后血浆P选择素浓度22℃储存和新鲜PRP相比无显著性差异(P0.05);但-80℃储存明显高于新鲜PRP(P0.05)。牛凝血酶组PRG凝固时间明显低于TRAP组和壳聚糖组(P0.01)。加入激活剂后1h,2h,4h后,牛凝血酶组血块凝缩率明显大于TRAP组和壳聚糖组(P0.05)。24h时,三组PRG血块凝缩率无显著性差异(P0.05)。牛凝血酶组、壳聚糖组和TRAP组分泌的TGF-β1浓度和总量没有显著性差异(P0.05);TRAP组血浆PDGF浓度和总量明显高于牛凝血酶组和壳聚糖组(P0.05～0.01)。 结论:采用一次离心力200g 10分钟,二次离心力1200g 10分钟的二次离心法制备的PRP,血小板浓度和回收率高,避免了离心过程导致的血小板聚集,可能是PRP制备较有效的方法。22℃储存的PRP中血小板浓度较高,归一化后血小板活化率小,是较理想的储存PRP的方法。TRAP作为激活剂与壳聚糖和牛凝血酶相比,是可行的,能够提供更长的工作时间,释放更多的生长因子。
【图文】：

二次离心力 1200g；离心方法三：一次离心力 1200g，二次四：一次离心力 1200g，二次离心力 1200g。一次离心 1移至另一离心管，平衡后以二次离心力再次离心 10min，两层，上层上清液为乏血小板血浆（PPP）,下层为血小板/4 上清液弃掉，剩余约 0.6ml 摇匀，即为 PRP，如图 1-2

分为上下两层，上层上清液为乏血小板血浆（PPP）,下层为血小板浓缩物（PC），吸取约 3/4 上清液弃掉，剩余约 0.6ml 摇匀，即为 PRP，如图 1-2、图 1-3 所示。图 1-1 暴露新西兰大白兔颈静脉
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R782;R457

【引证文献】

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本文编号：2708091